細(xì)胞庫編號：bio-73113            

細(xì)胞株名稱：NR8383  大鼠肺泡巨噬細(xì)胞

種屬：大鼠

組織來源：肺，巨噬細(xì)胞，肺泡

生長特性：貼壁和懸浮混合生長

形態(tài)特征：圓形有折光性。

細(xì)胞特征：NR8383 (正常大鼠，1983年8月3日)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。 細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。 隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。 細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。 NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF beta前體。在博萊霉素刺激下，TGF beta mRNA表達(dá)也上升。 細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。 1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%。 即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。 NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。

微生物，支原體檢測：陰性

培養(yǎng)條件：

完全培養(yǎng)基：90%F12K（含2mM L-glutamine）+10%胎牛血清

血清我們推薦用：GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37 ℃，CO2：5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況。之后用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液到無菌的離心管內(nèi)，1000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后棄上清，加新配的完全培養(yǎng)液10ml接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)（如果細(xì)胞多，也可接種兩瓶）。原瓶換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代時，只要輕拍培養(yǎng)瓶后加夠培養(yǎng)液一分為二即可。如果有些細(xì)胞拍打不下來，可按以下方法做：

1.吸出拍打下的細(xì)胞懸液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過來讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加6-8ml/瓶完全培養(yǎng)基即可。

注：1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度�？醇�(xì)胞的形態(tài)請在10X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請及時與我們聯(lián)。

凍存方法：

凍存液：90%完全培養(yǎng)液，10%DMSO。現(xiàn)用現(xiàn)配。

  儲  存：液氮。