Thp-1單核細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇細(xì)節(jié)介紹
細(xì)胞簡介
該細(xì)胞是從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
細(xì)胞信息
細(xì)胞名稱：Thp-1人單核細(xì)胞白血病
生長特性：懸浮、低密度容易聚團(tuán)，高密度分散
倍增時(shí)間：60-70 小時(shí) （PubMed= 6970727 ）; 26 小時(shí) （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小時(shí) （DSMZ=ACC-16）
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實(shí)際細(xì)胞量決定）細(xì)胞密度在8X106/ml 進(jìn)行傳代，不要超過1X106/ml
培養(yǎng)基推薦配方 ：RPMI-1640（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-200）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）+β-Mer 終濃度：0.05mM（中喬新舟 貨號(hào)：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巰基乙醇）的作用：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。
（該圖片引用ATCC細(xì)胞培養(yǎng)參考圖）
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞對(duì)密度有一定依賴性，如果復(fù)蘇時(shí)離心去除了凍存液，建議復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不要進(jìn)行操作。密度低時(shí)細(xì)胞會(huì)抱團(tuán)生長屬于細(xì)胞快速增殖生長的一個(gè)階段，是正常情況。
THP-1細(xì)胞的傳代
A、THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞且具有低密度依賴性，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×105個(gè)活細(xì)胞/ mL時(shí)需要進(jìn)行傳代。細(xì)胞密度不要超過1×106活細(xì)胞/ mL。
B、比例一般為1:2-4，可以分瓶后補(bǔ)充培養(yǎng)液，不需要離心，t25培養(yǎng)瓶分瓶后補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml，
C、如果對(duì)懸浮細(xì)胞密度把控不好，最佳的方式是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
D、培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細(xì)胞。
（ 中喬新舟出庫細(xì)胞圖4X ，該圖片室溫放置5min拍照，該密度可進(jìn)行傳代，細(xì)胞計(jì)數(shù)密度為1.2X106/ml）
THP-1細(xì)胞的凍存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用無血清細(xì)胞凍存液。
B、收集生長狀態(tài)較好的細(xì)胞于15 mL離心管中，調(diào)整細(xì)胞濃度至細(xì)胞數(shù)量大約200萬-300萬/mL凍存液為宜。
C、根據(jù)情況放入-80℃培養(yǎng)箱最多放置3個(gè)月，盡快轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長期保存。
THP-1培養(yǎng)常見問題
1、THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？
少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正�，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。密度高時(shí)，細(xì)胞會(huì)自然分散開，如果密度高聚團(tuán)還是很嚴(yán)重，通過觀察細(xì)胞狀態(tài)、巰基乙醇添加量、或更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。
2、THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？
(中喬新舟細(xì)胞客戶咨詢圖)
2.1 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，不需要擔(dān)心。可以輕吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。
2.2 但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)器皿是否異常�？捎梅荰C處理過的培養(yǎng)瓶，不利于細(xì)胞貼壁。
3、THP-1復(fù)蘇不起來怎么辦？
3.1 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量，凍存時(shí)活細(xì)胞密度不能低于100萬-300萬/mL，同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴性，細(xì)胞復(fù)蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復(fù)，如有細(xì)胞碎片，待細(xì)胞密度增大后通過低速離心去除。
3.2該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理，細(xì)胞密度低時(shí)，培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換。
3.3 THP-1細(xì)胞中需要添加β-巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可直接添加至完培中長期儲(chǔ)存，會(huì)影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。
該細(xì)胞是從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
細(xì)胞信息
細(xì)胞名稱：Thp-1人單核細(xì)胞白血病
生長特性：懸浮、低密度容易聚團(tuán)，高密度分散
倍增時(shí)間：60-70 小時(shí) （PubMed= 6970727 ）; 26 小時(shí) （PubMed= 25984343 ）; ~35-50 小時(shí) （DSMZ=ACC-16）
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實(shí)際細(xì)胞量決定）細(xì)胞密度在8X106/ml 進(jìn)行傳代，不要超過1X106/ml
培養(yǎng)基推薦配方 ：RPMI-1640（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-200）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號(hào)：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟 貨號(hào)：CSP006）+β-Mer 終濃度：0.05mM（中喬新舟 貨號(hào)：CSP005，例：500ml添加500ul）
β-Mer（巰基乙醇）的作用：β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對(duì)THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加巰基乙醇的比例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。
（該圖片引用ATCC細(xì)胞培養(yǎng)參考圖）
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇
THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞對(duì)密度有一定依賴性，如果復(fù)蘇時(shí)離心去除了凍存液，建議復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不要進(jìn)行操作。密度低時(shí)細(xì)胞會(huì)抱團(tuán)生長屬于細(xì)胞快速增殖生長的一個(gè)階段，是正常情況。
THP-1細(xì)胞的傳代
A、THP-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞且具有低密度依賴性，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×105個(gè)活細(xì)胞/ mL時(shí)需要進(jìn)行傳代。細(xì)胞密度不要超過1×106活細(xì)胞/ mL。
B、比例一般為1:2-4，可以分瓶后補(bǔ)充培養(yǎng)液，不需要離心，t25培養(yǎng)瓶分瓶后補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基到7ml，
C、如果對(duì)懸浮細(xì)胞密度把控不好，最佳的方式是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
D、培養(yǎng)一周左右可以離心一次，以去除一些死細(xì)胞。
（ 中喬新舟出庫細(xì)胞圖4X ，該圖片室溫放置5min拍照，該密度可進(jìn)行傳代，細(xì)胞計(jì)數(shù)密度為1.2X106/ml）
THP-1細(xì)胞的凍存
A、用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用無血清細(xì)胞凍存液。
B、收集生長狀態(tài)較好的細(xì)胞于15 mL離心管中，調(diào)整細(xì)胞濃度至細(xì)胞數(shù)量大約200萬-300萬/mL凍存液為宜。
C、根據(jù)情況放入-80℃培養(yǎng)箱最多放置3個(gè)月，盡快轉(zhuǎn)移到液氮中進(jìn)行長期保存。
THP-1培養(yǎng)常見問題
1、THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？
少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正�，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這種情況。密度高時(shí)，細(xì)胞會(huì)自然分散開，如果密度高聚團(tuán)還是很嚴(yán)重，通過觀察細(xì)胞狀態(tài)、巰基乙醇添加量、或更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。
2、THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？
(中喬新舟細(xì)胞客戶咨詢圖)2.1 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，不需要擔(dān)心。可以輕吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。
2.2 但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分以及培養(yǎng)器皿是否異常�？捎梅荰C處理過的培養(yǎng)瓶，不利于細(xì)胞貼壁。
3、THP-1復(fù)蘇不起來怎么辦？
3.1 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低，凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量，凍存時(shí)活細(xì)胞密度不能低于100萬-300萬/mL，同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴性，細(xì)胞復(fù)蘇后需要培養(yǎng)3-5天狀態(tài)才能恢復(fù)，如有細(xì)胞碎片，待細(xì)胞密度增大后通過低速離心去除。
3.2該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理，細(xì)胞密度低時(shí)，培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換。
3.3 THP-1細(xì)胞中需要添加β-巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配，不可直接添加至完培中長期儲(chǔ)存，會(huì)影響β-巰基乙醇的穩(wěn)定性。
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