01 細(xì)胞轉(zhuǎn)染概述及應(yīng)用

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源的基因如DNA、RNA等采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。是生物醫(yī)學(xué)研究的重要工具，廣泛應(yīng)用于以下方面：

■研究基因功能

通過導(dǎo)入特定研究的目的基因，使目的基因過表達(dá)，研究其在細(xì)胞中的高表達(dá)情況下細(xì)胞功能的影響�；蛘呃�用siRNA或shRNA使目的基因不表達(dá)或者表達(dá)降低，研究基因缺失情況下對(duì)細(xì)胞功能的影響。

■蛋白質(zhì)表達(dá)生產(chǎn)

通過轉(zhuǎn)染編碼所需目的蛋白的基因，進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)及純化，也可以通過融合熒光蛋白，研究目的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布或者定位。

■細(xì)胞工程

通過轉(zhuǎn)染和篩選，獲得能夠穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞系，即構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。

■藥物篩選與毒性測(cè)試

轉(zhuǎn)染特定基因，從而驗(yàn)證藥物靶點(diǎn)的有效性。通過高通量篩選，篩選出潛在藥物。

■基因治療

導(dǎo)入或者修復(fù)基因，治療一些遺傳病，也可轉(zhuǎn)染編碼抗原基因，進(jìn)行疫苗研發(fā)。

02 細(xì)胞轉(zhuǎn)染分類

Part.1
按導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)。

瞬轉(zhuǎn)：外源基因得以表達(dá)但它們并不會(huì)整合到宿主細(xì)胞的基因組中，隨細(xì)胞分裂逐漸丟失。

穩(wěn)轉(zhuǎn)：外源基因能夠整合到細(xì)胞的基因組中，隨細(xì)胞分裂持續(xù)表達(dá)，使得轉(zhuǎn)染細(xì)胞的子代細(xì)胞也同樣表達(dá)外源基因。
 

二者區(qū)別：

區(qū)別	瞬轉(zhuǎn)	穩(wěn)轉(zhuǎn)
目的不同	短時(shí)間獲得高水平的基因表達(dá)	獲得穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞株
穩(wěn)定性不同	瞬時(shí)轉(zhuǎn)染由于基因未整合到染色體體，穩(wěn)定性較差	由于經(jīng)過篩選，目的基因整合到染色體中，其穩(wěn)定性好
方法不同	一般采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法	一般更偏向于病毒轉(zhuǎn)染、電轉(zhuǎn)等方法
篩選過程不同	轉(zhuǎn)染后一般不需要進(jìn)行篩選	一般需要經(jīng)過篩選，挑選出目的基因整合到宿主染色體中的細(xì)胞
質(zhì)粒不同	質(zhì)粒不需要帶有抗性	一定要帶有特定的抗性以便于后續(xù)的克隆株篩選
表達(dá)時(shí)效不同	目的基因的表達(dá)通常持續(xù)幾天，不能穩(wěn)定遺傳	長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)目的基因
實(shí)驗(yàn)周期不同	轉(zhuǎn)染后24h-96h收細(xì)胞	2-3周甚至3-4周篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞克隆

Part.2

按照方法分為物理介導(dǎo)法、化學(xué)介導(dǎo)法，生物介導(dǎo)法。

物理介導(dǎo)法：通過物理的方法（例如電穿孔法、顯微注射法）直接將外源核酸導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)，一般不需要使用任何化學(xué)物質(zhì)。效率較高，但對(duì)細(xì)胞損傷大，細(xì)胞存活率低。

化學(xué)介導(dǎo)法：通過使用一些化學(xué)物質(zhì)，如PEI、脂質(zhì)體等，來改變細(xì)胞膜的物理和化學(xué)性質(zhì)，使其對(duì)外源性DNA或RNA具有親和力，從而實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移。這種方法實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，周期短，但大多數(shù)不能長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)外源基因。

生物介導(dǎo)法：一般利用病毒作為載體，將外源基因包裝后導(dǎo)入細(xì)胞，如慢病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒。這種方法可以實(shí)現(xiàn)外源基因的長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，也可進(jìn)行體內(nèi)、體外高效、特異性的基因轉(zhuǎn)移。但實(shí)驗(yàn)操作較為繁瑣，實(shí)驗(yàn)周期較其他方法長(zhǎng)。

 

 

由此看來，細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法多種多樣。選擇哪種轉(zhuǎn)染方法，取決于實(shí)驗(yàn)需求、實(shí)驗(yàn)室條件、細(xì)胞的類型和轉(zhuǎn)染效率等因素。

目前，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用較多的主要有化學(xué)介導(dǎo)中的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染）和生物介導(dǎo)中的慢病毒轉(zhuǎn)染法。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染操作簡(jiǎn)單，但有些細(xì)胞系不容易轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率低，給實(shí)驗(yàn)帶來很多不便。而病毒轉(zhuǎn)染具有能夠穩(wěn)定表達(dá)，宿主范圍廣的優(yōu)勢(shì)，且其對(duì)非分裂的原代細(xì)胞、干細(xì)胞等具有較高的轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均有效，同樣適用于體內(nèi)活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，如動(dòng)物成瘤等。

 
我們尚恩生物公司對(duì)常用的細(xì)胞系，原代細(xì)胞進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染，包括細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白（ZsGreen）或者紅色熒光蛋白（mCherry、RFP）、細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染化學(xué)發(fā)光LUC、細(xì)胞慢病毒SV40永生化轉(zhuǎn)染，總共近40種穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。也可以進(jìn)行指定細(xì)胞的慢病毒轉(zhuǎn)染。
 

✔ 慢病毒轉(zhuǎn)染服務(wù)

服務(wù) 編號(hào)	轉(zhuǎn)染類別	試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)	實(shí)驗(yàn)周期
SNTS-L001	GFP穩(wěn)轉(zhuǎn)	獲得GFP穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞	3-4周
SNTS-L002	RFP穩(wěn)轉(zhuǎn)	獲得RFP穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞	3-4周
SNTS-L003	mCherry穩(wěn)轉(zhuǎn)	獲得mCherry穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞	3-4周
SNTS-L004	LUC穩(wěn)轉(zhuǎn)	獲得LUC穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞	3-4周
SNTS-L005	SV40永生	獲得SV40永生化的細(xì)胞(以原代細(xì)胞為主)	6-8周

武漢尚恩生物簡(jiǎn)介：

武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖高新區(qū)光谷生物城，專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù)，公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物房，已通過GB/T19001-2016/ISO9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證，并獲得高新技術(shù)企業(yè)等多項(xiàng)榮譽(yù)。

公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品，提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購服務(wù)；細(xì)胞庫儲(chǔ)存細(xì)胞系700余種，同時(shí)通過不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類；公司還提供人源、小鼠源細(xì)胞系的STR鑒定，其他種屬細(xì)胞的種屬鑒定服務(wù)，細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)，污染檢測(cè)等細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

尚恩生物細(xì)胞類產(chǎn)品為國內(nèi)各大高校生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)院、生物研究機(jī)構(gòu)及相關(guān)診斷、制藥公司等提供完善的細(xì)胞資源庫和相關(guān)配套試劑，公司將不斷追求卓越產(chǎn)品品質(zhì)為廣大科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)！尚恩生物 — 您專業(yè)的細(xì)胞供應(yīng)商！