細(xì)胞貼壁的過(guò)程：細(xì)胞首先分泌細(xì)胞外基質(zhì)，這種細(xì)胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面（培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿的底面）。然后，細(xì)胞通過(guò)其表面表達(dá)的黏附因子與這些細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。一些特殊的促細(xì)胞附著物質(zhì)（如層粘連蛋白、纖維連接蛋白、Ⅲ型膠原、血清擴(kuò)展因子等）可能參加細(xì)胞的貼附過(guò)程。這些促細(xì)胞附著因子均為蛋白質(zhì)，存在于培養(yǎng)液尤其是血清中。在培養(yǎng)過(guò)程中，這些帶陽(yáng)電荷的促貼附因子先吸附于底物上，懸浮的圓形細(xì)胞再與已吸附的有促貼附物質(zhì)的底物附著，以后細(xì)胞將伸展成其原來(lái)的形態(tài)。所以細(xì)胞貼壁與否和細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達(dá)的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。

細(xì)胞不貼壁的一些原因:
1. 胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng)：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)�造成�?xì)胞死亡。
2. 缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無(wú)血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。
3. 支原體或細(xì)菌的污染。
4. 培養(yǎng)液配制、儲(chǔ)存不當(dāng)，如pH值過(guò)堿，Gln量太少等原因。
5. 復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。
6. 接種細(xì)胞數(shù)目太少，無(wú)法分泌足夠的細(xì)胞外基質(zhì)。
7. 復(fù)蘇時(shí)處理速度太慢，復(fù)蘇過(guò)程不當(dāng)。

如何促進(jìn)細(xì)胞貼壁?
1. 適度消化細(xì)胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng)，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
2. 最好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。
3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。
4. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。
5. 復(fù)蘇新的細(xì)胞，第一周用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原。
6. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)。
7. 細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi)，最好不要晃動(dòng)，以免影響貼壁。
8. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長(zhǎng)。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層，另外降低pH、Ca2+含量和溫度，均有利于上皮細(xì)胞生長(zhǎng)。