細胞因子(cytokine,CK):是由免疫細胞(如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等)和某些非免疫細胞(內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)經(jīng)刺激而合成(一般是免疫細胞)、分泌的一類生物活性物質(zhì)分泌的蛋白質(zhì),在體內(nèi)廣泛參與免疫調(diào)節(jié)及炎癥反應、組織修復、刺激造血系統(tǒng)、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動,在抵抗外來病原及維持機體內(nèi)環(huán)境平衡中均起重要作用。
細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學。
1、生物學測定法 其原理是根據(jù)細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據(jù)某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或?qū)Σ《镜囊种谱饔眠M行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。
2、分子生物學測定法 目前采用的技術(shù)有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內(nèi)細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。
3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用于細胞因子的檢測。
細胞因子的檢測方法對比:
1、酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
原理:使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。由于酶的催化頻率很高,故可放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。
優(yōu)點:避免特異性抗體直接標記,便宜。
缺點:所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯(lián)反應所致的人工假象
2、流式細胞儀(CBA)
原理:利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆!郎y物復合體所散發(fā)的熒光,從而測定待測物的數(shù)量。
優(yōu)點:所需樣本量少、快速(實驗6-8h可以完成)操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效(同一個樣品可以同時檢測多個因子)、安全、接近生物體的分析條件(全血檢測保留細胞及生化微環(huán)境更準確反應了體內(nèi)狀況)。
缺點:價格略貴
3、免疫印跡法(WB)
原理:是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細胞或者組織樣本中的蛋白,經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標蛋白與特有性一抗結(jié)合,再與辣根過氧化物酶(HRP)標記的第二抗體起反應,經(jīng)過底物顯色,分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標蛋白在樣本中的表達情況
優(yōu)點:高特異性、高敏感性
缺點:細胞因子分析量較小,用WB進行檢測有些不合適