實(shí)驗(yàn)原理:

   蛋白質(zhì)雙向電泳的第一向?yàn)榈入娋劢梗↖soelectrofocusing,IEF）,根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離；第二向?yàn)镾DS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進(jìn)行分離。經(jīng)過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量信息。

   等電聚焦是一種特殊的聚丙烯酰胺凝膠電泳，其特點(diǎn)是在凝膠中加入一種兩性電解質(zhì)載體，從而使凝膠在電場中形成連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)是典型的兩性電解質(zhì)分子，它在大于其等電點(diǎn)的pH環(huán)境中以陰離子形式向電場的正極移動，在小于其等電點(diǎn)的pH環(huán)境中以陽離子形式向負(fù)極移動。這種泳動只有在等于等電點(diǎn)的pH環(huán)境中才停止。如果在一種pH梯度的環(huán)境中將含有各種不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)混合樣品進(jìn)行電泳，那么在電場作用下，不管這一群混雜的蛋白質(zhì)分子原始分布如何，各蛋白質(zhì)分子將按照它們各自的等電點(diǎn)大小在pH梯度相對應(yīng)的位置進(jìn)行聚集經(jīng)過一定時(shí)間后，不同的蛋白質(zhì)分便分割在不同的區(qū)域之中。這個(gè)過程稱作等電聚焦，蛋白質(zhì)聚集的部位蛋白質(zhì)所帶電荷為零，測定此部位的pH值，即可知該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。

   十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），主要用于測定蛋白質(zhì)亞基分子量，SDS是一種陰離子去污劑，作為變性劑和助溶劑，它能段裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白質(zhì)分子的二級和三級結(jié)構(gòu)。強(qiáng)還原劑則能使半光氨酸殘基之間的二硫鍵段裂。在樣品和凝膠中加入SDS和還原劑后，分子被解聚成它們的多肽鏈。解聚后的氨基酸側(cè)鏈與SDS充分結(jié)合形成帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)-SDS膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，這就消除了不同分子之間原有電荷的差異。因此這種膠束在SDS-聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中的電泳遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷的影響，而主要取決于蛋白質(zhì)或亞基分子量的大小。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15KD到200KD之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對數(shù)呈線性關(guān)系。

   蛋白質(zhì)雙向電泳是將蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量兩種特性結(jié)合起來進(jìn)行蛋白質(zhì)分離的技術(shù)，因而具有較高的分辨率和靈敏度，已成為蛋白質(zhì)特別是復(fù)雜體系中的蛋白質(zhì)檢測和分析的一種強(qiáng)有力的生化手段。

   本公司擁有Bio-Rad和GE兩套雙向電泳系統(tǒng)，最多一次可以進(jìn)行12塊凝膠的電泳，增強(qiáng)了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。同時(shí)本公司可以進(jìn)行7cm，17cm和24cm的各種PH范圍的雙向電泳，染色方式可以采用質(zhì)譜兼容的銀染，也可以采用靠馬斯亮蘭染色，染色完成后凝膠采用Image Master Lab Scan進(jìn)行掃描，凝膠圖像分析可以采用最新的Image Master 2D Platinum和PDQuest 2D 進(jìn)行，包括凝膠強(qiáng)度校正、蛋白點(diǎn)檢測、背景扣除、蛋白點(diǎn)匹配、差異蛋白數(shù)據(jù)分析等步驟，并最后對蛋白凝膠點(diǎn)進(jìn)行切取。

   同時(shí)本公司還可以提供熒光差異凝膠雙向電泳（DIGE）、蛋白質(zhì)肽指紋圖譜鑒定（PMF）、串聯(lián)質(zhì)譜鑒定（MALDI-TOF/TOF）、ESI源LC-MS/MS、Shotgun混合蛋白鑒定、蛋白質(zhì)De-novo測序、定量蛋白質(zhì)組（iTRAQ）、蛋白質(zhì)磷酸化和二硫鍵位點(diǎn)分析、蛋白質(zhì)精確分子量測定、western-blot、免疫組化、病理學(xué)檢測、熒光定量PCR、生物信息學(xué)分析等服務(wù)。

   詳情請參看公司網(wǎng)站：http://

上海博苑蛋白質(zhì)組技術(shù)服務(wù)中心是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，主要從事以蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)組為基礎(chǔ)的，包括基因及基因組、表型組、生物信息學(xué)分析在內(nèi)的多方面的服務(wù)。公司堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，打造一流的科技服務(wù)平臺；同時(shí)公司秉承客戶至上的原則，竭誠為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)、高效的技術(shù)服務(wù)，幫助廣大科研工作者在自己的研究領(lǐng)域創(chuàng)造新的成果，為生命科學(xué)的研究與發(fā)展提供強(qiáng)大支持。