HSF人皮膚成纖維細(xì)胞的應(yīng)用及傳代方法！
 
一、背景
 
HSF人皮膚成纖維細(xì)胞來(lái)源于人皮膚組織的貼壁細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)形態(tài)為長(zhǎng)梭形或多角形，支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性。培養(yǎng)條件需添加含胎牛的血清。
 
成纖維細(xì)胞胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。
 
另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態(tài)尚可依細(xì)胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發(fā)生改變。
 
電鏡下，其胞質(zhì)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體。處于成熟期或稱靜止?fàn)顟B(tài)的成纖維細(xì)胞，胞體變小，呈長(zhǎng)梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體均不發(fā)達(dá)。它具有較強(qiáng)的分裂增殖能力，適應(yīng)性強(qiáng)，是最容易培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞類型之一。
 
貼壁細(xì)胞傳代方法：
 
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
 
2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
 
3、輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
4、移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
 
二、應(yīng)用
 
用于絞股藍(lán)總皂苷對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞光老化模型凋亡信號(hào)通路的影響研究：
 
通過(guò)采用長(zhǎng)波紫外線（UVA）輻射人體皮膚成纖維細(xì)胞（HSF），誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生光老化現(xiàn)象后，采用不同濃度絞股藍(lán)總皂苷（Gyp）含藥血清進(jìn)行干預(yù)，觀察各組皮膚細(xì)胞在增殖活性、ROS含量、細(xì)胞凋亡數(shù)量以及凋亡相關(guān)調(diào)控因子Bcl-2，Bax，Caspase-3mRNA和蛋白表達(dá)變化，探究Gyp干預(yù)光老化細(xì)胞凋亡作用相關(guān)分子機(jī)制，探索Gyp對(duì)HSF細(xì)胞光老化損傷有明確防治作用新靶點(diǎn)，為絞股藍(lán)作為靶點(diǎn)藥物用于防治人體皮膚光老化及相關(guān)疾病提供理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
 
實(shí)驗(yàn)材料：健康SPF級(jí)Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠20只，體重200～250g。皮膚成纖維細(xì)胞株（HSF）；絞股藍(lán)總皂苷（MUST-11031401）；DMEM高糖培養(yǎng)液；胎牛血清（FBS）；胰蛋白酶；PBS緩沖液；二甲基亞砜（DMSO）；UVA光源（20W），紫外光光度計(jì)；MTT；細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒；水合氯醛；青/鏈霉素；無(wú)水乙醇；75%乙醇；兔抗人Bax、Bcl-2及內(nèi)參β-actin抗體；HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗；ECL發(fā)光試劑盒；Trizol；Bax、Bcl-2及內(nèi)參引物；PCR儀、電泳儀，凝膠成像分析系統(tǒng)；細(xì)胞蛋白提取試劑；BCA法蛋白定量試劑盒；ECL發(fā)光液；電熱恒溫振蕩器；酶標(biāo)儀；凝膠成像分析系統(tǒng)；水平搖床；垂直板電泳裝置；電泳儀；轉(zhuǎn)印電泳槽等。
 
Gyp對(duì)光老化皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響：
 
1、絞股藍(lán)總皂苷（Gyp）含藥血清制備將20只SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為空白血清對(duì)照組和Gyp含藥血清組。含藥血清組給予Gyp粉末生理鹽水溶液（生藥質(zhì)量濃度為80mg Kg-1d-1）灌胃，空白血清對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)灌胃7d。然后于腹主動(dòng)脈采血，血液經(jīng)離心后分離出血清，凍存?zhèn)溆谩?br />  
2、人皮膚成纖維細(xì)胞（HSF）培養(yǎng)及光老化模型復(fù)制將HSF細(xì)胞株消化傳代。待倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底時(shí)，放入冰箱中保存。造模時(shí)，取出凍存的HSF細(xì)胞，解凍后將細(xì)胞懸液移入培養(yǎng)瓶，加入新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
 
微生物菌種查詢網(wǎng)自設(shè)細(xì)胞系板塊，是細(xì)胞株提供中心,專業(yè)提供代次低、周期短、活性好的細(xì)胞株。與國(guó)內(nèi)外多家研制單位，生物醫(yī)藥，第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所有著良好穩(wěn)定的長(zhǎng)期合作關(guān)系！歡迎廣大客戶來(lái)詢！
https://www.biobw.org/

微生物菌種查詢網(wǎng)成立于二〇一四年十月份，是一家專業(yè)提供中國(guó)微生物菌種，標(biāo)準(zhǔn)菌種，質(zhì)控菌株,ATCC菌種,細(xì)胞系以及培養(yǎng)基等產(chǎn)品的查詢網(wǎng)站！自成立至今，已提供各類微生物菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基數(shù)量達(dá)四萬(wàn)余份，接待咨詢客戶數(shù)量5萬(wàn)余人次，成交合同數(shù)量2萬(wàn)余份！是國(guó)內(nèi)微生物菌種及細(xì)胞信息最全的網(wǎng)站！本站由北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司創(chuàng)建，獲得中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心的技術(shù)支持，并達(dá)成戰(zhàn)略協(xié)議，我們提供的ATCC菌種達(dá)15000余份,ATCC各類細(xì)胞系達(dá)3000余份,保藏中心涵蓋菌種資源更達(dá)數(shù)十萬(wàn)余份！
除此之外，我們還擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇耍�中�?guó)微生物菌種查詢網(wǎng)與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
為更好服務(wù)社會(huì)，創(chuàng)造雙方利益最大化，微生物菌種查詢網(wǎng)提供的產(chǎn)品：質(zhì)控菌種，標(biāo)準(zhǔn)菌種，中國(guó)微生物菌種4萬(wàn)多株，細(xì)胞系/株1萬(wàn)多株其中金黃色葡萄球菌，大腸埃希氏菌（大腸桿菌），沙門氏菌，黑曲霉，銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌，鏈球菌，白色念珠菌，志賀氏菌等為常用菌株。歡迎您的咨詢！