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活細(xì)胞熒光示蹤探針CFSE是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光示蹤探針，眾所周知，細(xì)胞的熒光標(biāo)記是確定總細(xì)胞數(shù)或樣品中存在多少活細(xì)胞的有效方法。流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光染色是分析異質(zhì)細(xì)胞群的有力工具。熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物是非熒光分子，其擴散到細(xì)胞中并被細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光產(chǎn)物。熒光產(chǎn)物只能在具有完整細(xì)胞膜的細(xì)胞中積累; 因此，具有滲漏膜的死細(xì)胞不會被染色。FDA及其類似物（如CDCFDA）的膜轉(zhuǎn)運和細(xì)胞內(nèi)水解的精確動力學(xué)與細(xì)胞功能有關(guān)，因此FDA標(biāo)記可用于通過流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡監(jiān)測細(xì)胞。FDA染料標(biāo)記細(xì)胞的熒光強度在細(xì)胞系和菌株之間差異很大，可能是由于細(xì)胞內(nèi)酯酶活性的差異。CFSE是胺反應(yīng)性FDA衍生物，廣泛用于通過流式細(xì)胞儀監(jiān)測細(xì)胞增殖。AAT Bioquest為流式細(xì)胞儀提供了這種方便的包裝尺寸。可以用90uL無水DMSO將每瓶CFSE重構(gòu)成10mM的儲備濃度。應(yīng)保護DMSO儲備溶液避光，并在-20°C下與干燥劑一起儲存，避免凍融。CFSE是胺反應(yīng)性FDA衍生物，廣泛用于通過流式細(xì)胞儀監(jiān)測細(xì)胞增殖。AAT Bioquest為流式細(xì)胞儀提供了這種方便的包裝尺寸�？梢杂�90uL無水DMSO將每瓶CFSE重構(gòu)成10mM的儲備濃度。應(yīng)保護DMSO儲備溶液避光，并在-20°C下與干燥劑一起儲存，避免凍融。CFSE是胺反應(yīng)性FDA衍生物，廣泛用于通過流式細(xì)胞儀監(jiān)測細(xì)胞增殖。AAT Bioquest為流式細(xì)胞儀提供了這種方便的包裝尺寸�？梢杂�90uL無水DMSO將每瓶CFSE重構(gòu)成10mM的儲備濃度。應(yīng)保護DMSO儲備溶液避光，并在-20°C下與干燥劑一起儲存，避免凍融。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的活細(xì)胞熒光示蹤探針CFSE。
產(chǎn)品說明書
操作步驟
1.準(zhǔn)備10 mMDMSO儲備溶液
對于＃22022：將5.6mg溶于1ml DMSO中以制備10mM儲備溶液（1mg / ml相當(dāng)于1.8mM）; 對于＃22028，向每個小瓶中加入90μLDMSO以制備10mM儲備溶液。
注意：應(yīng)及時使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并在< -20 o C冷凍。避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。
2.準(zhǔn)備CFSE工作解決方案
在使用前準(zhǔn)備CFSE 工作溶液（0.5至5μM），用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液稀釋來自步驟1 的DMSO儲備液（2 000至2,000次），pH值7.通過渦旋混合均勻。
3.用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞：
3.1用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時間。
3.2離心細(xì)胞，每管取1-5×10 5個細(xì)胞。
3.3將細(xì)胞重懸于500μL 染料工作溶液中（來自步驟2）。
3.4在室溫或37 ° C 下用染料溶液孵育細(xì)胞10到30分鐘，避光。
3.5從細(xì)胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500μL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管獲得1-5×10 5個細(xì)胞。
3.6使用流式細(xì)胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監(jiān)測Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光變化。
