Cell Meter 熒光法細胞內(nèi)pH檢測試劑盒

貨號	21180	存儲條件	f/l
規(guī)格	1000 Tests
Ex (nm)	503	Em (nm)	528
分子量		溶劑
產(chǎn)品詳細介紹

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簡要概述

        Cell Meter 熒光法細胞內(nèi)pH檢測試劑盒  是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的胞內(nèi)pH檢測試劑盒，細胞內(nèi)pH變化涉及多種生理和病理過程，包括細胞增殖，細胞凋亡，受精，惡性腫瘤，多藥耐藥性，離子轉(zhuǎn)運，溶酶體貯積癥和阿爾茨海默病。 Cell Meter 熒光細胞內(nèi)pH測定試劑盒利用AAT Bioquest專有的熒光指示劑測量相對細胞內(nèi)pH變化。它是一種均相的，動力學(xué)的活細胞熒光測定法，它使用標準程序或酸負荷程序。設(shè)計標準方案用于治療靶標，同時治療時細胞內(nèi)pH降低。 “酸負荷”程序旨在測量與GPCR活化或生長因子活性引起的細胞代謝變化相關(guān)的細胞內(nèi)pH的增加。在“酸負荷”程序中，在將熒光pH染料以最小體積加載到細胞中之后加入氯化銨溶液。該“酸加載”步驟之后是在相對大體積（~4X）的緩沖液中加入激動劑。突然的體積變化引發(fā)來自細胞的氨（NH 3）流出，導(dǎo)致細胞內(nèi)pH的快速降低，并因此導(dǎo)致熒光信號的降低。通過相對熒光信號增加測量激動劑對隨后的細胞內(nèi)pH恢復(fù)的影響。百螢生物是AAT Bioquest 的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter 熒光法細胞內(nèi)pH檢測試劑盒 。

產(chǎn)品說明書

操作步驟

運行pH測定以獲得標準細胞

1.將100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）RatioWorks TM BCFL，AM染料加工溶液加入到細胞板中。注意：如果化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長培養(yǎng)基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/孔）。

2.將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下將板孵育另外30分鐘。注意：如果測定需要37°C，立即進行實驗，無需進一步室溫孵育。

3.使用HHBS或所需的緩沖液制備復(fù)合板。

4.通過監(jiān)測Ex / Em = 490 / 535nm（截止= 515nm）或505 / 535nm和430 / 535nm（截止= 515nm）處的熒光進行pH測定以進行比率測量。添加化合物為50μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）。注意：化合物應(yīng)在化合物添加后3至5分鐘內(nèi)完成，但在測定開發(fā)過程中建議至少8分鐘的數(shù)據(jù)收集。

 

運行pH測定酸

1.從細胞板上除去生長培養(yǎng)基。

2.將50μL/孔/ 96孔板RatioWorks™BCFL，AM染料加工溶液添加到細胞板中。

3.將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下將板孵育另外30分鐘。注意：如果測定需要37°C，立即進行實驗，無需進一步室溫孵育。

4.加入5μL的220mM NH 4 Cl并將板離心5秒。在室溫下孵育15分鐘。注意：NH4Cl溶液應(yīng)在HHBS（組分C）中新鮮制備。

5.使用HHBS或所需的緩沖液制備復(fù)合板。

6.通過監(jiān)測Ex / Em = 490 / 535nm（截止= 515nm）或505 / 535nm和430 / 535nm（截止= 515nm）處的熒光進行pH測定以進行比率測量。添加的化合物為200μL/孔/ 96孔板。注意：化合物應(yīng)在化合物添加后3至5分鐘內(nèi)完成，但在測定開發(fā)過程中建議至少8分鐘的數(shù)據(jù)收集。

 

示例數(shù)據(jù)分析和數(shù)據(jù)

        從空白標準孔獲得的讀數(shù)（RFU）用作陰性對照。 從其他標準的讀數(shù)中減去該值，以獲得基線校正值。 然后，繪制標準讀數(shù)以獲得標準曲線和方程。 該等式可用于計算Carbachol樣品。 

圖1. CHO-M1細胞中的卡巴膽堿劑量反應(yīng)。 在96孔黑壁/透明底板中，將CHO-M1細胞以每100μL/孔60,000個細胞接種過夜。 將生長培養(yǎng)基用50μL/孔的RatioWorks BCFL，AM染料加載溶液替換37℃1小時，然后用5μL/孔的220mM NH 4 Cl孵育15分鐘。 通過FlexStation（Molecular Devices）添加Carbachol（200μL/孔）以達到最終指示的濃度。 使用Ex / Em = 490 / 535nm（截止= 515nm）產(chǎn)生熒光信號。

西安百螢生物科技有限公司是一家專注從事生物、化學(xué)試劑及其試劑盒的高新技術(shù)企業(yè)；主要以熒光探針，分子探針，核酸/蛋白質(zhì)標記、細胞檢測等技術(shù)和產(chǎn)品為研發(fā)核心，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于基因合成、細胞檢測、活體示蹤，抗體標記、新藥篩選等領(lǐng)域。

美國AAT Bioquest公司是生物光譜領(lǐng)域全球領(lǐng)導(dǎo)者，產(chǎn)品暢銷全球。長年以來百螢生物與AAT Bioquest互補優(yōu)勢，為國內(nèi)外廣大用戶提供光譜檢測，底物顯色，熒光發(fā)光技術(shù)等全系列解決方案。近年來，百螢生物已與全球多家知名藥企、CRO公司、眾多高校及科研單位建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系；我們的服務(wù)宗旨：不斷創(chuàng)新，為廣大科研用戶提供最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)；主要分為以下幾個產(chǎn)品線：

a)開發(fā)和生產(chǎn)國際頂級熒光標記探針和發(fā)光探針。這些熒光標記探針和發(fā)光探針是用于標記生物大分子例如，蛋白質(zhì)，核酸，碳水化合物的主要工具；
b)檢測蛋白質(zhì)，核酸和活細胞熒光和熒光探針；
c)新型各種酶活性熒光探針和發(fā)光探針(特別是用與研究蛋白酶，蛋白激酶和氧化還原酶熒光標記探針和發(fā)光探針)；
d) 開發(fā)用于分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究試劑和試劑盒；
e)生物鈣膜電位探針和神經(jīng)生物學(xué)熒光標記探針和發(fā)光探針；

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