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活細胞成像監(jiān)控NK細胞：突破傳統(tǒng)檢測，讓細胞監(jiān)測變成“直播”

瀏覽次數(shù)：143　發(fā)布日期：2025-2-26　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

前言：
自然殺傷（NK）細胞是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其無需事先敏化即可識別并消滅惡性或病毒感染細胞。在前臨床研究中，NK細胞殺傷實驗用于評估NK細胞療法的效果。這些實驗通過將NK細胞與熒光標記的靶細胞共培養(yǎng)，測量靶細胞裂解程度以評估NK細胞活性。然而，傳統(tǒng)染料如Calcein-AM的快速泄漏影響了實驗的準確性。本研究采用綠色熒光染料CellTracker CMFDA及Celloger^® Pro自動活細胞成像系統(tǒng)，改善了檢測精度。

材料與方法：
靶細胞制備：

使用U-2OS細胞，分三種條件：
- 穩(wěn)定表達EGFP標記的H2B；
- 使用Calcein-AM染色；
- 使用CellTracker CMFDA染色。
各組細胞在無血清培養(yǎng)基中染色后，于48孔板中以3×10⁴密度接種，并與NK-92效應細胞按不同效應/靶（E:T）比（5:1、10:1、20:1）共培養(yǎng)。
通過4倍物鏡的 Celloger^® Pro 在24h內(nèi)每間隔1h采集圖像，使用 Celloger^® 分析軟件對實驗結果進行分析，通過紅綠熒光強度比值以評估NK細胞毒性。

結果：

圖 1. NK-92 與表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞的殺傷試驗
(A) NK-92 細胞與表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞按 5:1、10:1 和 20:1 的不同效應物與靶標（E:T）比例共培養(yǎng)。在 24 小時內(nèi)，每小時用配備 4 倍鏡頭的 Celloger® Pro 采集一次圖像。(B）圖中顯示了表達 GFP:H2B 的 U-2OS 細胞在 24 小時內(nèi)的熒光強度比（紅/綠），比較了三種不同的 E:T 比率： 5:1、10:1 和 20:1。

圖 2. 用活細胞染色染料對 U-2OS 細胞進行的 NK-92 殺傷試驗
(A、B）NK-92 細胞與 U-2OS 細胞共培養(yǎng)，用Calcein-AM（A）或 CellTracker CMFDA（B）染色，效應物與靶標（E:T）的比例分別為 5:1、10:1 和 20:1。在 24 小時內(nèi)每小時用 Celloger® Pro 4X 采集一次圖像。(C）圖中顯示了 U-2OS 細胞在 24 小時內(nèi)用Calcein-AM 或 CellTracker CMFDA 染色后的熒光強度比（紅/綠），比較了三種不同的 E:T 比率： 5:1、10:1 和 20:1。

圖 3. CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 的染色保留比較
(A)比較 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 在 U-2OS 細胞中 24 小時的染色保留時間的延時圖像。(B）圖中顯示的是歸一化綠色熒光強度值，比較了 CellTracker CMFDA 和 Calcein-AM 隨時間變化的保留情況。

熒光標記細胞： GFP-H2B靶細胞的實驗表明，隨著E:T比增加，紅熒光（死亡細胞）強度上升，綠熒光（活細胞）下降，且細胞聚集增多。
染料比較： CellTracker CMFDA在染料保持性及長時間追蹤方面優(yōu)于Calcein-AM。CMFDA熒光信號穩(wěn)定超過12小時，避免了Calcein-AM的快速泄漏引起的誤差。
優(yōu)點總結： CellTracker CMFDA具有更高靈活性，適合快速高效的實驗設置，而GFP表達細胞系雖精確但制備耗時且成本高。

亮點總結
1️⃣ 創(chuàng)新監(jiān)測方法：使用Celloger^® Pro自動化活細胞成像系統(tǒng)，結合優(yōu)化染色試劑，實現(xiàn)更精準的NK細胞毒性分析。
2️⃣ 穩(wěn)定性對比：實驗顯示CellTracker CMFDA染劑相較傳統(tǒng)Calcein-AM染劑，具有更高的細胞內(nèi)保留率和更低的漏染，確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性。
3️⃣ 實時觀察：Celloger^® Pro可直接觀測細胞形態(tài)變化及死亡過程，為細胞毒性研究提供更深層次的洞察。

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