親和層析中生物素和親和素的特點(diǎn)及應(yīng)用
瀏覽次數(shù):713 發(fā)布日期:2024-8-16
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生物素(biotin,B)廣泛分布于動(dòng)、植物組織中,常從含量較高的卵黃和肝組織中提取,分子量244.31Da.生物素分子有兩個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)(如圖1),其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán),是與親和素結(jié)合的主要部位;II環(huán)為噻吩環(huán),C2上有一戊酸側(cè)鏈,其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的唯一結(jié)構(gòu),經(jīng)化學(xué)修飾后,生物素可成為帶有多種活性基團(tuán)的衍生物——活化生物素;罨锼乜梢栽诘鞍踪|(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián),包括蛋白質(zhì),核酸,多糖,脂類(lèi)等。
親和素(avidin,AV)亦稱(chēng)抗生物素蛋白、卵白素,是從卵白蛋白中提取的一種由4個(gè)相同亞基組成的堿性糖蛋白,分子量為68kD,等電點(diǎn)pI=10.5;耐熱并耐受多種蛋白水解酶的作用.尤其是與生物素結(jié)合后,穩(wěn)定性更好。生物素與親和素間的作用是已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用,親和常數(shù)(K)為1015mol/L,比抗原與抗體間的親和力(K=105~1011mol/L)至少高1萬(wàn)倍。并且,二者的結(jié)合穩(wěn)定性好專(zhuān)一性強(qiáng),不受試劑濃度,PH環(huán)境,抑或蛋白變性劑等有機(jī)溶劑影響。由于每個(gè)親和素能結(jié)合4個(gè)分子的生物素,這一特點(diǎn)可以用于構(gòu)建一個(gè)多層次信號(hào)放大系統(tǒng)。因此,BAS即可用于微量抗原、抗體及受體的定量、定性檢測(cè)及定位觀察研究,亦可制成親和介質(zhì)用于上述各類(lèi)反應(yīng)體系中反應(yīng)物的分離、純化。
低耐壓:生物素瓊脂糖微球
生物素瓊脂糖凝膠是用于純化或去除親和素或鏈霉親和素樣本的產(chǎn)品,生物素是通過(guò)間隔臂以多種共價(jià)結(jié)合的方式固定在基材上的,最大限度避免配基脫落。
這種結(jié)合非常緊密,可以應(yīng)用于不可逆結(jié)合(如:從某個(gè)樣本中去除親和素組分)
高耐壓:鏈親和素 HC 瓊脂糖微球霉
ABT Streptavidin 6HC 是用于固定生物素化的生物分子,重組鏈霉親和素通過(guò)高度交聯(lián)固定在 6% 的瓊脂糖微球上。