4月17日，腫瘤藥效部研發(fā)科學(xué)家朱金娥為大家主講「乳腺癌動(dòng)物模型構(gòu)建及應(yīng)用案例」線上課程，以下為本次直播常見問題匯總與解答。

FAQ:
1.McF-7細(xì)胞系的免疫缺陷小鼠模型構(gòu)建？
2.如何成功建立原位成瘤小鼠模型？
3.雌激素包埋流程及注意事項(xiàng)？
4.BT-474皮下接種的數(shù)據(jù)參考？
5.頸動(dòng)脈注射的注射體積和細(xì)胞量推薦是多少？

Q：McF-7細(xì)胞系的免疫缺陷小鼠模型構(gòu)建？
A：McF-7是ER⁺的乳腺癌細(xì)胞，構(gòu)建模型時(shí)需要添加雌激素藥片，細(xì)胞接種時(shí)需要添加基質(zhì)膠，該模型體內(nèi)生長周期一般在7~8周，腫瘤體積達(dá)到2000mm³實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。雌激素藥片最好選擇緩釋60天以上的。體內(nèi)接種對于細(xì)胞活率和活性狀態(tài)要求較高，細(xì)胞活率在90%以上，最好添加基質(zhì)膠。該模型對于宿主依賴性較高，免疫缺陷程度越高，構(gòu)建模型的細(xì)胞條件會(huì)有所下降。賽業(yè)NKG小鼠是高度免疫缺陷小鼠，McF-7是ER⁺的乳腺癌細(xì)胞在NKG上構(gòu)建的模型，可以降低細(xì)胞接種量5M/mouse，在裸鼠上構(gòu)建模型推薦用10M/mouse。

Q：如何成功建立原位成瘤小鼠模型？
A：有3點(diǎn)影響因素：
1、細(xì)胞活性，構(gòu)建原位一般使用luc過表達(dá)的陽性細(xì)胞株。細(xì)胞培養(yǎng)條件，細(xì)胞接種的活率，細(xì)胞自身熒光表達(dá)能力都會(huì)影響原位成瘤；
2、宿主小鼠，原位模型對于小鼠品系依賴較大，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，是使用免疫缺陷小鼠還是使用免疫重建小鼠亦或者選擇免疫健全小鼠。小鼠品系也是影響原位模型構(gòu)建的一大因素；
3、手術(shù)因素，原位模型（除去乳墊原位接種）一般都需要進(jìn)行麻醉后接種到原位進(jìn)行模型構(gòu)建。麻醉和手術(shù)的因素會(huì)影響到小鼠存活。

Q：雌激素包埋流程及注意事項(xiàng)？
A：小鼠麻醉，一般雌激素包埋在小鼠的左側(cè)肩胛骨皮下，包埋的入口是在小鼠左側(cè)靠后肢處。皮膚剪開一個(gè)可以容納雌激素藥片的口子，用直鑷將雌激素夾緊，遞送到左側(cè)肩胛骨皮下。

Q BT-474皮下接種的數(shù)據(jù)參考？

乳腺癌細(xì)胞BT-474乳墊移植腫瘤及體重生長曲線（n=6）

A：將細(xì)胞以乳墊注射的形式接種到8周的C-NKG和NOD/scid小鼠體內(nèi)，并在不同的時(shí)間點(diǎn)測量成瘤體積。細(xì)胞接種前一天，在左側(cè)皮下接種新型雌激素藥片，細(xì)胞接種量為5×10⁶/只和1×10⁷/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示BT-474在C-NKG和NOD/scid容易成瘤。腫瘤體積預(yù)計(jì)在接種后8天達(dá)到100-200mm³,在接種后50天達(dá)到1500mm³實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，給藥窗口期預(yù)計(jì)在42天左右。

Q：頸動(dòng)脈注射的注射體積和細(xì)胞量推薦是多少？
A：頸動(dòng)脈注射方法：麻醉小鼠，分離一測頸動(dòng)脈，縫合線預(yù)備3個(gè)結(jié)，先將頸外動(dòng)脈縫合結(jié)打好，開始注射，注射結(jié)束后，迅速將頸總動(dòng)脈近心端的結(jié)打死，再打遠(yuǎn)心端的縫合結(jié)。一般推薦40ul/mouse。