小分子化合物的選擇方法、儲存方式和應(yīng)用
瀏覽次數(shù):881 發(fā)布日期:2023-3-1
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為了幫助小可愛解決開學(xué)的 “煩惱” ,小 M 今日特來解鎖小分子化合物 (說白了,就是萌 Cece 為大家整理的小分子產(chǎn)品的使用小貼士,讓省心走進(jìn)科研,速速收藏吧)。
Part 1: 產(chǎn)品選擇
(1) 同一個靶點,好多產(chǎn)品
選擇產(chǎn)品之前,一定要明確實驗?zāi)康模》肿右种苿?激活劑大多是依據(jù)具體的信號通路或者靶點進(jìn)行分類的,確定好靶點信號通路之后,才能準(zhǔn)確的選擇出合適的產(chǎn)品進(jìn)行實驗。當(dāng)然,同一個靶點會有好多的產(chǎn)品,這個時候該如何抉擇:
a. 文獻(xiàn)就是 YYDS!文獻(xiàn)自有 everything! ( 見推文:檢索工具總動員,總有一款適合你) b. 文獻(xiàn)里居然不多,還好靶點是確定的!這時可以優(yōu)先選擇生物活性高或者在 MCE 官網(wǎng)排名高的 (排名高的產(chǎn)品往往有過客戶驗證),當(dāng)然,一千個科研人,一千個實驗結(jié)果,具體問題具體分析。
(2) 同一個產(chǎn)品,不同的形式
鹽形式是活性藥物成分 (API) 存在的一種固態(tài)形式,與游離態(tài)具有相同的活性成分。成鹽可改變化合物的理化性質(zhì),如溶解度、結(jié)晶度、吸濕性和穩(wěn)定性等,多數(shù) API 常常以鹽酸鹽、甲磺酸鹽、hydrobromide
、富馬酸鹽、醋酸鹽、鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽等形式。既然不改變活性,那它們存在區(qū)別到底是什么? 最大區(qū)別的就是溶解度了!(還有個區(qū)別就是有無現(xiàn)貨)
■ 以熱賣產(chǎn)品 Compound C 為例
在 2 個產(chǎn)品都有現(xiàn)貨的前提下,就要從溶解度的角度來選擇了。從溶解度數(shù)據(jù)來看,2 個產(chǎn)品在 DMSO 中的溶解度均為 10 mM。HY-13418A Compound C 在水中需要加酸調(diào)節(jié) pH 才能增加溶解性,而 HY-13418 Compound C 鹽酸鹽形式易溶于水。所以在相同活性的情況下,只是細(xì)胞實驗,那么二者皆可;動物實驗,那么優(yōu)先選擇具有水溶性的鹽形式啦!
再以 HY-12815A (MCC950 sodium) 與 HY-12815 (MCC950) 為例,兩個產(chǎn)品生物功能一樣,但 HY-12815 沒有現(xiàn)貨,所以優(yōu)先選擇 HY-12815A。
Part 2: 產(chǎn)品儲存
(1) 一掃通,通往的順利之路 在拿到產(chǎn)品后,可先瞅瞅產(chǎn)品 COA,COA 上面會明確標(biāo)明產(chǎn)品的本身形態(tài):固體 or 液體 小 M 接到客戶反饋:我沒有買那個 10 mM*1 mL 規(guī)格的,為什么到手是液體呢?有些產(chǎn)品因為自身熔點低,比如維生素 E (熔點在 2-3 °C),本身就是液體),純度,儲存條件及注意事項。當(dāng)然,沒有紙質(zhì)說明書也沒關(guān)系。 (見推文: 科研助攻:MCE 那些小工具你都會用嗎?)
(2) 產(chǎn)品儲存,不糾結(jié)
大多化合物較穩(wěn)定,儲存條件為:固體粉末:-20°C 3 年,4°C 2 年;溶液:-80°C 半年,-20°C 1 個月 ;蛘唔敹嗉觽條件:Protect from light (避光);Away from moisture (產(chǎn)品易吸潮,需防潮保存);Stored under nitrogen (充氮氣保存,產(chǎn)品易被氧化,需要惰性條件保存)當(dāng)然,也有部分 “不安分” 的產(chǎn)品,標(biāo)簽和說明書都注明。
*該產(chǎn)品在溶液狀態(tài)不穩(wěn)定,建議您現(xiàn)配現(xiàn)用,即刻使用(不建議配制儲備液長期保存,最好做到現(xiàn)用現(xiàn)配)
Part 3: 產(chǎn)品使用
(1) 開蓋前離心 在產(chǎn)品運輸過程中,粉末或溶液可能會附著到管壁或管蓋上。開封前使用離心機(jī)低速離心,可減少產(chǎn)品的損失。
(2) 產(chǎn)品配置
■ 細(xì)胞實驗 :
購買實驗使用的量很少啦!規(guī)格較小,且產(chǎn)品本身也很穩(wěn)定,可直接按照官網(wǎng)推薦的溶劑 (比較常見是 DMSO, ddH2O, 無水乙醇等) 配置成母液,可分裝儲存。
小貼士
多數(shù)產(chǎn)品在細(xì)胞實驗使用劑量都在 μM 級別,但是給藥前還是得做好功課,有些藥物,比如 AICAR,3-MA 它們的給藥濃度就是很高哇!0.5-10 mM 是它們的常用劑量。
有些小可愛還會發(fā)現(xiàn):咦,有些溶劑怎么好生奇怪?DMF?THF?這是什么?非常規(guī)溶劑,莫要一棒子打死,合理利用,一樣是你的好幫手。(見推文:溶劑大比拼——細(xì)胞實驗篇)
■ 動物實驗: 害,說到動物實驗,值得糾結(jié)的點就更多了: 小白:“小 M, 10% DMSO 會不會把我的鼠毒死啊”;“小 M, 我的藥是 0.5% CMC-NA 直接溶的,我能一次把多天的溶好嗎?”;“小 M, 我不會算。!”;“小 M, 助溶劑這么復(fù)雜,我怎么設(shè)置對照?” ......(見推文:小鼠的吐槽大會) 靚M 憂傷中:“小鼠以體重 25 g 為例,正常小鼠沒有嚴(yán)重免疫缺陷的鼠,200 uL 給藥體系,DMSO 占比 10%:也就是里面有 20 uL,小鼠可耐受,當(dāng)然,體弱小鼠另說”;“且不說小鼠多天用同一管藥物,發(fā)生污染了小鼠心情如何,更重要的是,家人們,你確定這是可以復(fù)溶么?”;“劑量計算,何不使用傳聞中的溶解度計算器?”;“當(dāng)然設(shè)置對照!想要實驗做的好,對照必然少不了!(見推文:對照設(shè)計-動物實驗篇)
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小貼士
配制溶液時若出現(xiàn)難溶情況,可以采用水浴加熱 (一般 37 ℃;多肽產(chǎn)品一般控制在 25℃ 左右) 或者超聲 (20-40 kHz,注意是清洗超聲儀器!探頭超聲儀器不推薦,不推薦!) 的方式輔助溶解。