著有 “玄學(xué)” 之稱的分子生物學(xué)，師兄師姐說(shuō)小 M 要做的都是 “升級(jí)打怪入門級(jí)” 的實(shí)驗(yàn)，然而，實(shí)驗(yàn)記錄本上清晰地羅列著自己整理的堪稱完美的 (假裝看懂的 Steps) 實(shí)驗(yàn)流程，可是完美的流程下，總是充斥著不絲滑的操作——
提 DNA，PCR，電泳，純化回收，構(gòu)載體；提 RNA，反轉(zhuǎn)錄，文庫(kù)構(gòu)建，qPCR……如何快速完成一套絕美的逆襲�。�！

完美操作第一步

打好科研“地基”，從核酸提取開始

 

核酸是遺傳信息的攜帶者，是基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。如果要對(duì)核酸的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究，首先就要對(duì)核酸進(jìn)行提取和純化。

 

核酸提取是個(gè)啥？字面意思，就是把核酸從樣本中提取出來(lái)唄！

那一般常見的提取方法有哪些呢？

 

表 1.核酸提取的常見方法

• 提取步驟

核酸提取主要包括細(xì)胞裂解、核酸吸附、雜質(zhì)漂洗和核酸洗脫四步。
那具體到實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)撨x擇哪種提取方法呢？這就要看個(gè)人的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及實(shí)驗(yàn)組的經(jīng)費(fèi)情況啦！
磁珠法提取效果當(dāng)然很好，但貴是真的貴，而且還得購(gòu)買配套的磁力架，批量提取的話，還是不太建議的！自配試劑的優(yōu)缺點(diǎn)是顯而易見的，若后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)核酸要求不高 (如常規(guī)的 DNA 提取，后續(xù)用做普通 PCR 擴(kuò)增)，這種提取方法也可選擇。

但如果對(duì)核酸的質(zhì)量要求比較高 (如定量或文庫(kù)構(gòu)建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和純度問(wèn)題)，小 M 還是比較推薦受眾度較高的離心柱法；至于質(zhì)粒提取，考慮到純度與濃度，肯定也選擇這種性價(jià)比較高的離心柱法啦！  
 
 
來(lái)來(lái)來(lái)，排隊(duì)隊(duì)，順帶開啟 Kits 介紹模式……

 

MCE 新推出三款核酸提取純化試劑盒，均利用硅膠膜離心柱對(duì)核酸進(jìn)行特異性吸附，改良的裂解液可以促進(jìn)細(xì)胞充分裂解、蛋白變性、核酸釋放；改良的吸附緩沖液能有效地促進(jìn)核酸結(jié)合到硅膠膜上；最后經(jīng)過(guò)洗脫即可獲得高純度核酸。
 

Kit one (基因組 DNA 小量抽提試劑盒)：我適用于從動(dòng)物組織/細(xì)胞、酵母、大腸桿菌等樣本中有效提取并純化基因組 DNA，內(nèi)含 蛋白酶 K 可去除蛋白污染，經(jīng)純化的基因組 DNA 后續(xù)可用于 PCR、qPCR、酶切、Southern Blot 等實(shí)驗(yàn)。

 
Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提試劑盒)：我適用于從血漿、血清、全血、組織勻漿液、痰液、動(dòng)物細(xì)胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不僅包含 蛋白酶 K，更有核酸助沉劑助力，提取的核酸那可不團(tuán)團(tuán)來(lái)嘛！純化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等實(shí)驗(yàn)。
 
Kit three (質(zhì)粒大量抽提試劑盒)：我適用于從 ≤500 mL LB 培養(yǎng)基培養(yǎng)的大腸桿菌細(xì)胞中高效的提取質(zhì)粒 DNA。RNase A 可對(duì) RNA 進(jìn)行清除，柱上去除內(nèi)毒素，Very good!
 
MCE 新上線核酸提取試劑盒 (離心柱型)，嘗鮮試用裝，抓緊時(shí)間領(lǐng)取吧！

 

產(chǎn)品名稱	免費(fèi)試用裝鏈接
Genomic DNA Mini Purification Kit	Free Sample
Viral DNA/RNA Mini Purification Kit	Free Sample
Plasmid DNA Maxi Purification Kit	Free Sample

完美操作第二步

避開操作“雷區(qū)”，拿到高純度核酸

 

 小M：Protocol 很完美，實(shí)際操作過(guò)程中，也難免會(huì)遇到各種小問(wèn)題。

 

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下面小 M 對(duì) RNA 提取過(guò)程中常見問(wèn)題進(jìn)行了一一盤點(diǎn)。

(此處主要針對(duì) RNA 提取，文末彩蛋有 DNA 和質(zhì)粒提取注意事項(xiàng)匯總哦)。
 
 
RNA 提取后續(xù)試驗(yàn)主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文庫(kù)構(gòu)建等，RNA 沒提好，后面的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題也是連貫性的，一個(gè)不小心可就都 game over 了。這個(gè) RNA 提取，真的是……腦殼疼！
 

來(lái)來(lái)來(lái)，這道題，我們重點(diǎn)講一下。

 

 

 
 
影響 RNA 得率低的因素很多？
抽提 RNA，當(dāng)然要做到 “三從四德”。
 
一從：外源酶污染？NO！
二從：內(nèi)源酶活性？NO！
三從：抽提目的性？YES！
 
一德：使用無(wú) RNase 耗材，選擇合適的操作環(huán)境。
二德：確定樣本后選擇合適的裂解液，樣本與裂解程度不匹配，抽提結(jié)果也會(huì)大打折扣。
三德：裂解、勻漿、抽提、洗脫——快！準(zhǔn)！狠！
四德：衡量抽提性價(jià)比的標(biāo)準(zhǔn)是后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，得率不是唯一標(biāo)準(zhǔn)。即我們需要明確下一步的實(shí)驗(yàn)，如果是 PCR，其實(shí)驗(yàn)本身對(duì) RNA 的質(zhì)量要求沒有那么高，而 qPCR 對(duì) RNA 的要求相對(duì)又高點(diǎn)，但如果要做 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建，其對(duì) RNA 的要求就很高了，因此 RNA 質(zhì)量便是 “經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)” 了，頗有 “一損俱損” 的感覺了。
 
 小白: “三從四德” 我也懂，但 RNA 得率這么低具體是為什么呢？

 小M：還不是因?yàn)?RNA 太嬌貴，放太久會(huì)降解，環(huán)境不干凈會(huì)降解，吹口氣也能降解~

 

 

彩蛋時(shí)間到！！!

 
 
 

 

 

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