蛋白質(zhì)N端測(cè)序樣品要求
瀏覽次數(shù):3975 發(fā)布日期:2019-3-27
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檢測(cè)儀器:島津 PPSQ-31A 蛋白多肽自動(dòng)測(cè)序儀
一、 蛋白質(zhì)N端測(cè)序的主要應(yīng)用:
1.樣品:蛋白質(zhì),多肽樣品的氨基酸序列測(cè)定
2.優(yōu)勢(shì):能連續(xù)測(cè)定 60 個(gè)以上的氨基酸序列
3.來(lái)源:天然提。▌(dòng)物/植物/微生物);合成多肽;重組蛋白等
二、 樣品要求:
1.純度:>95(基于摩爾數(shù))
2.含量:50-100pmol(液體體積控制在 20ul)
3.修飾封閉:N 端未被封閉
4.樣品形式:液體;干粉;PVDF 膜
5.無(wú)干擾物:蛋白酶;氨基酸;胺;鹽分;乙醛;去污劑等
三、 客戶(hù)提供信息:
1.純度:純度檢測(cè)結(jié)果及圖譜信息
2.修飾:樣品可能修飾情況
3.制備方法:如 SDS,HPLC 及其它方式
4.驗(yàn)證目的:提供理論序列
5.表觀分子量
其它注意事項(xiàng):
1.郵寄要求:使用干冰冷凍保護(hù)
2.液體樣品:
可用溶劑:蒸餾水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以及三甲基胺水溶液。
不可用的溶劑:氨鹽、Tris 等,含有 1 級(jí)、2 級(jí)胺的鹽溶液,含有 SDS 的溶液
3.固體樣品:
干燥處理的樣品,請(qǐng)先確認(rèn)干燥處理前的溶劑中不含有上述不兼容的溶劑。如果含有不兼容的溶劑時(shí),請(qǐng)告知我方檢測(cè)人員。
4.PVDF 膜:注意以下方面
1)樣品量:5-8 條泳道,每條泳道的樣品盡量用最高濃度樣品,上最大體積(盡量使條帶長(zhǎng)胖為正常的 2-3 倍寬度)
2)硝酸纖維素膜:具有耐藥性,不能使用。
3)在電轉(zhuǎn)印中使用的緩沖液盡可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的緩沖液時(shí),請(qǐng)告知我方檢測(cè)人員。
4)染色劑推薦使用考馬斯亮藍(lán)(CBB-R250)。
5)推薦使用下列的 PVDF 膜:
廠家 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品代碼 |
日本 Genetex |
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8.5x9cm,10pcs |
PVM020C8590 |
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13x14cm,10pcs |
PVM020C1314 |
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20x20cm,20pcs |
PVM020C2020 |
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20cmx3m,1roll |
VM020C3R |
PEBiosystems |
ProBlott |
20x20cm,10pcs |
400994 |
MiniProBlott |
10x10cm,10pcs |
401194 |
BIORAD |
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7x8.4cm,10pcs |
162-0186 |
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10x15cm,10pcs |
162-0180 |
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20x20cm,10pcs |
162-0181 |
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26cmx330cm,1roll |
162-0184 |