糖苷鍵很少對(duì)糖蛋白的功能產(chǎn)生影響，因此通常不需要確定。然而，糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)高度復(fù)雜，評(píng)估N-糖的糖苷鍵的構(gòu)型和位置對(duì)分析糖蛋白的結(jié)構(gòu)是有幫助的。已知有五種常見的N-聚糖鍵，最常見的是N-乙酰氨基葡糖與天冬酰胺（GlcNAcβ1-Asn）連接。與Asn連接的其他類型包括：哺乳動(dòng)物和古生菌的層粘連蛋白中的葡萄糖，古生菌中的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），鼠李糖素細(xì)菌。也有報(bào)告顯示，葡萄糖在甜玉米中與精氨酸連接。
HILIC-UHPLC分析N-聚糖鍵
N-聚糖通過N-糖苷酶F（Peptide N Glycosidase F，PNGase F）反應(yīng)從糖蛋白中水解出來。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）標(biāo)記，然后用多種外切糖苷酶消化。最后，通過親水相互作用色譜法（HILIC）結(jié)合熒光和質(zhì)譜檢測(cè)對(duì)聚糖進(jìn)行分析。
N-聚糖鍵分析一般步驟1. 樣品制備
2. N聚糖水解
3. 2-AB標(biāo)記和標(biāo)記的聚糖與一系列外切糖苷酶順序反應(yīng)
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外，可以通過MS/MS片段確定詳細(xì)的聚糖結(jié)構(gòu)
內(nèi)切糖苷酶的作用：
內(nèi)切糖苷酶能從糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不會(huì)從結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分子中水解寡糖。內(nèi)切糖苷酶通過破壞聚合物中兩個(gè)糖單體之間的糖苷鍵起作用。
內(nèi)切糖苷酶H：水解低聚甘露糖和雜合N-聚糖
內(nèi)切糖苷酶F：水解簡(jiǎn)單的二價(jià)N-聚糖
糖型分析
糖基化位點(diǎn)分析
糖基化位點(diǎn)及該位點(diǎn)糖型分析
N-糖分析服務(wù)
N糖修飾及修飾位點(diǎn)分析服務(wù)
鞘糖脂聚糖分析
