分子信標(biāo)的介紹
分子信標(biāo)技術(shù)由Tyagi和Krammer提出,分子信標(biāo)長約25個核苷酸,在空間結(jié)構(gòu)上呈發(fā)夾型,由環(huán)莖桿組成.環(huán)部序列與靶DNA序列互補,長約18-20個核苷酸,莖桿部分長約5-7個核苷酸,由GC含量較高的與靶序列無關(guān)的互補序列構(gòu)成,分子信標(biāo)的5’端標(biāo)記報告基團(tuán),3’端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。當(dāng)分子信標(biāo)處于自由狀態(tài)時,發(fā)夾結(jié)構(gòu)的兩個末端靠近使F與Q靠近,F(xiàn)被淬滅;當(dāng)有靶序列存在時,分子信標(biāo)與靶序列結(jié)合,使分子信標(biāo)的莖桿區(qū)被拉開,此時R熒光不能被淬滅,可檢測到熒光信號,常用的熒光-淬滅分子對有Fam-DABCYL、Hex-DABCYL、TET-DABCYL、TAMRA-DABCYL、TexasRed-DABYCL等.
分子信標(biāo)探針檢測的優(yōu)點:
A.可進(jìn)行核酸實時(Real-time)檢測,在PCR體系中加入熒光信標(biāo)探針,并把PCR儀與熒光光譜儀相連,可以對PCR反應(yīng)過程隨時進(jìn)行監(jiān)測并進(jìn)行精確定量;
B.特異性強,與線性寡核苷酸探針相比,莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)的分子信標(biāo)檢測特異性更高,對靶序列中單個堿基的錯配、缺失或插入突變均能檢測出來;特別適合做SNP分析。
C.靈敏度高,低至1拷貝的核酸也能檢出;
D.內(nèi)標(biāo)定量的線性范圍比Taq Man探針寬2個數(shù)量級,從103/ml ~1011/ml血清;
E.有效消除核酸交叉污染,因為反應(yīng)與檢測直接在封閉中進(jìn)行;
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公司擁有從事基因工程、細(xì)胞工程、單克隆抗體研究的現(xiàn)代化實驗室和先進(jìn)的精密設(shè)備,如:實時PCR 擴(kuò)增儀、多肽合成儀、 DNA 合成儀、 DNA 序列分析儀、 FPLC 、高壓液相色譜儀、凍干機(jī)、 CO2 培養(yǎng)箱、大型搖床等。
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