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甲基化real time PCR(MSP)
Biotnt MS- real time PCR 技術(shù)服務(wù):設(shè)計(jì)MS-real time PCR 引物;合成;預(yù)實(shí)驗(yàn);計(jì)算樣本中的甲基化含量。
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問(wèn):1689
最后更新:2021-3-23半年訪問(wèn):3
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實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)服務(wù)流程:

一、預(yù)實(shí)驗(yàn)部分
1、 客戶提供樣本,為組織,血液,細(xì)胞或者其他樣本;客戶提供要檢測(cè)的基因;簽訂實(shí)驗(yàn)合同,收取預(yù)實(shí)驗(yàn)費(fèi)用;
2、 實(shí)驗(yàn)分為預(yù)實(shí)驗(yàn)部分和正式實(shí)驗(yàn)部分;預(yù)實(shí)驗(yàn)部分,客戶提供四個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本;
3、 Biotnt 進(jìn)行 預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本的基因組DNA 抽提;Biotnt 進(jìn)行 預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本的甲基化處理,即把DNA 中的胞嘧啶與亞硫酸氫鹽發(fā)生反應(yīng),并使胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶;并完成轉(zhuǎn)化后的DNA 純化和脫硫;
4、 Biotnt 查詢序列,并與客戶確認(rèn)序列的設(shè)計(jì)處(尋找CpG島),進(jìn)行甲基化引物的設(shè)計(jì);共設(shè)計(jì)兩套四對(duì)甲基化引物:非甲基化引物(U)和甲基化引物(M),(設(shè)計(jì)兩組,一組為正選,一組為候補(bǔ));
5、 Biotnt 合成以上引物對(duì);
6、 處理后的單鏈 DNA 樣本進(jìn)行real time PCR 預(yù)實(shí)驗(yàn);
7、 實(shí)驗(yàn)部分為 甲基化后的樣本,用兩套引物,進(jìn)行real time PCR, MS-PCR實(shí)驗(yàn);如果進(jìn)行雙重復(fù),則一個(gè)樣本應(yīng)有孔4的數(shù)據(jù),取均值進(jìn)行計(jì)算;如果進(jìn)行三重復(fù),則一個(gè)樣本應(yīng)有6孔的數(shù)據(jù),取均值進(jìn)行計(jì)算;根據(jù)比較甲基化和非甲基化引物的擴(kuò)增和溶解曲線,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)判斷;
8、 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),Biotnt 判斷預(yù)實(shí)驗(yàn)是否成功,如果成功,則進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)階段,如果不成功,看是否需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案,調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù);
9、 經(jīng)過(guò)兩次調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案,仍不能工作,鑒于甲基化real time PCR 的復(fù)雜性,Biotnt 會(huì)與客戶協(xié)商,提供目前的實(shí)驗(yàn)參數(shù)和實(shí)驗(yàn)過(guò)程,以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果,為客戶的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)提供方向和思路;實(shí)驗(yàn)終止,收取的預(yù)實(shí)驗(yàn)費(fèi)用不退回;
 
二、正式實(shí)驗(yàn):
1、 客戶提供樣本;
2、 Biotnt根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的參數(shù),進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn);提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)報(bào)告;
3、 實(shí)驗(yàn)結(jié)束,客戶確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并簽收發(fā)票后,Biotnt 以光盤(pán)形式,提供原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),整理后的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,實(shí)驗(yàn)儀器、試劑和耗材清單,以及引物序列;
 
Biotnt甲基化real time PCR具體實(shí)驗(yàn)計(jì)費(fèi)細(xì)節(jié):
總實(shí)驗(yàn):預(yù)實(shí)驗(yàn)為四個(gè)樣本;
一、預(yù)實(shí)驗(yàn)部分:4個(gè)樣本預(yù)實(shí)驗(yàn):合計(jì)2040元;
A、進(jìn)口原裝試劑盒Zymo research 基因組DNA 提取,4個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn),50元/樣本,共200元;
   抽提+質(zhì)量驗(yàn)證;
B、甲基化實(shí)驗(yàn),60元/樣本;4個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn),共計(jì)240元;
C、Real time PCR 甲基化引物的設(shè)計(jì)與合成,4套引物,引物費(fèi)用,800元;摸索實(shí)驗(yàn)條件,4個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn),共計(jì)800元;確定實(shí)驗(yàn)方法;
 
二、正式實(shí)驗(yàn)(10個(gè)樣本起做):
A、基因組DNA 提取和硫化處理:正式實(shí)驗(yàn),10個(gè)樣本起做,價(jià)格為100元/樣本;
具體步驟:基因組DNA 抽提,質(zhì)量驗(yàn)證;
B、real time PCR 實(shí)驗(yàn),MS-PCR, 雙重復(fù) 4孔數(shù)據(jù),120元/樣本。

 

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