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                                                              English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 技術(shù)服務(wù) > 生物研發(fā)服務(wù)> 分子與細胞 > microRNA質(zhì)粒/載體構(gòu)建
                                                              microRNA質(zhì)粒/載體構(gòu)建
                                                              microRNA質(zhì)粒/載體構(gòu)建(過表達載體構(gòu)建,靶基因報告載體/ 熒光素酶報告載體構(gòu)建 )
                                                              服務(wù)類別:分子與細胞總訪問:3438
                                                              最后更新:2011-8-23半年訪問:8
                                                              參考報價:
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                                                              • 公司簡介

                                                              microRNA 過表達載體構(gòu)建

                                                              真核生物MicroRNA的產(chǎn)生有三種形式。1)miRNA以長的pri-miRNA形式從基因組中轉(zhuǎn)錄出來;2)pri-miRNA被RNAaseIII內(nèi)切酶或剪接體組分切割,形成大約60~70nt的pre-miRNA;3)pre-miRNA被運出細胞核,進而在Dicer樣內(nèi)切酶切割下,形成miRNA。 

                                                              本公司提供miRNA質(zhì)粒的構(gòu)建服務(wù),采用U6、CMV啟動子構(gòu)建的miRNA表達載體,可以在細胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出miRNA,行使其功能。同時還可以提供pre-miRNA表達載體及腺病毒載體 (Adenoviral),慢病毒載體(Lentiviral),逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 (Retroviral) 病毒型載體構(gòu)建服務(wù)�;谳d體的miRNA構(gòu)建流程:
                                                               

                                                              1、客戶可選:
                                                                  提供不同長度、不同形式,由客戶自行設(shè)計的miRNA,由本公司將其克隆到miRNA表達載體上。
                                                                  也可據(jù)需要,提供來自Sanger miRNA數(shù)據(jù)庫的miRNA序列,由本公司將其克隆到miRNA表達載體上。
                                                                  提供商業(yè)化的miRNA表達載體。

                                                              2、合成設(shè)計好的DNA序列,將其克隆到客戶要求的載體上,并通過測序進行驗證。


                                                              3、構(gòu)建好的miRNA質(zhì)粒連同測序文件、產(chǎn)品說明書一起寄送到客戶手中。

                                                              本公司的可免費提供的miRNA常用表達載體有:
                                                              載體名稱 啟動子 篩選基因 標(biāo)記基因
                                                              pRNAi-U6.1/Neo  U6  Neomycin  GFP 
                                                              pRNAi-CMV3.2/Neo  CMV  Neomycin  GFP 
                                                              pRNAi-CMV4.1/Neo
                                                              (pSilencer4.1) 
                                                              CMV  Neomycin    
                                                               
                                                              microRNA靶基因報告載體/ 熒光素酶報告載體構(gòu)建 

                                                              A. 優(yōu)點:
                                                              MiRNA 熒光素酶報告載體具有以下優(yōu)點:
                                                              · 功能性檢測:是一種功能性的分析方法,用于監(jiān)測細胞內(nèi)miRNA介導(dǎo)的靶基因的調(diào)控
                                                              · 可定量分析: miRNAs介導(dǎo)的調(diào)控可以通過熒光素酶基因的表達進行定量監(jiān)測
                                                              · 可構(gòu)建穩(wěn)定細胞系–載體可用于構(gòu)建表達報告基因的穩(wěn)定細胞系.
                                                              B. 原理:
                                                              pLuc-3UTR報告載體是一系列基于熒光素酶報告的構(gòu)建體,用于監(jiān)測miRNA介導(dǎo)的細胞內(nèi)靶基因調(diào)控。每個載體含有CMV啟動子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達并與3 ' UTR結(jié)合,導(dǎo)致熒光素酶基因表達的抑制。因此miRNA介導(dǎo)的特異靶的調(diào)控可通過熒光素酶活*進行監(jiān)測。比較二個樣本熒光素酶活性可解析調(diào)控,明確差異。

                                                              本公司的可免費提供的microRNA靶基因報告載體 有: 

                                                              載體名稱 啟動子 標(biāo)記基因
                                                              pGL4.17  CMV   熒光素酶基因 
                                                              pGL-Basic  CMV  熒光素酶基因 
                                                              pGL3-Control  CMV  熒光素酶基因 
                                                              pRL-TK  CMV   熒光素酶基因 
                                                              bio-equip.com
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