細胞介紹
人前列腺癌細胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。這株細胞對5-α-二氫睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。這株細胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。它們僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。生長很慢，傳代后48小時內(nèi)不應(yīng)擾動。當培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)細胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細胞的條件下培養(yǎng)24到48小時，以使細胞再貼壁。此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)瓶內(nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個單獨的培養(yǎng)瓶中。請使用Corning的Cellbind培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。
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細胞特性
1）?來源：前列腺；左鎖骨淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶
2）?形態(tài)：上皮細胞樣
3）?含量：>1x106 個/mL
4）?污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）?規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
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運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
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細胞用途：僅供科研使用。
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細胞接受后的處理：
1）?收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2）?請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）?棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的完全培養(yǎng)基。
4）?如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5）?接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
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細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）?準備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）?培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）?凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．?細胞處理：
1）?復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）?細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.?棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.?加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.?按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.?將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）?細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

廈門逸漠生物科技有限公司(Xiamen Immocell Biotechnology Co.,Ltd.)坐落于廈門國家留學(xué)創(chuàng)業(yè)園(翔安)產(chǎn)業(yè)園，是一家專注于細胞生物學(xué)領(lǐng)域新產(chǎn)品、新技術(shù)開發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。
公司擁有一支具有深厚造詣和豐富經(jīng)驗的高端技術(shù)人才，建設(shè)了高規(guī)格的研發(fā)實驗室與生產(chǎn)車間，建立了規(guī)范的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、客服管理體系。
公司與國內(nèi)外多家醫(yī)院、高等院校、科研院所、生物醫(yī)藥公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場聲譽和廣泛的客戶認可，將努力成為生命科學(xué)界可靠的合作伙伴和堅強的技術(shù)后盾。
企業(yè)文化我們的使命：
深耕細胞技術(shù)，共筑人類健康從細胞技術(shù)著手，深入地、多維度地進行探索與積累,發(fā)展新產(chǎn)品與、新技術(shù)服務(wù)于生命科技探索以及人類疾病診療、人類健康發(fā)展事業(yè)。
我們的愿景：
成為生命科學(xué)領(lǐng)域被認可與喜歡的公司我們旨在構(gòu)建細胞資源與應(yīng)用中心。我們追求為客戶提供靠譜的產(chǎn)品與技術(shù)，讓他們能夠省心省力的專注于自己的科研工作。我們的愿景是讓客戶獲得成功的同時。成為他們的心中認可與喜歡的公司。
我們的經(jīng)營理念：
1.精益求精、開拓創(chuàng)新把成熟的產(chǎn)品做到非凡，把創(chuàng)新的產(chǎn)品做到超乎想象。
2.專業(yè)高效、合作共贏專業(yè)就是力量，專業(yè)才能高效;合作就會發(fā)展、合作才能共贏。我們秉持這種理念，以我們專業(yè)的產(chǎn)品和服務(wù)，與廣大合作伙伴共同應(yīng)對挑戰(zhàn),共同發(fā)展進步。
我們的價值觀：
1.勇于探索逸漠的精髓基于勇敢地探索，于逆境中的自我激勵、奮然而起，于順境中自我挑戰(zhàn)、自我超越。逸漠人選擇創(chuàng)造更多的價值，選擇擁有精彩的人生。
2.團結(jié)奮進面對神奇的世界、美好的未來，我們心懷敬畏與謙卑。我們改變自己,適應(yīng)時代，我們團結(jié)一致、凝聚力量，努力學(xué)習(xí)、不斷進步，一起展現(xiàn)我們的創(chuàng)造力與影響力。
3.守護誠信逸漠發(fā)展的過程就是不斷被別人認可的過程。我們忠誠于自己的事業(yè)，守信于他人的事務(wù)，這是我們的寶貴的財富、強大的基石。我們建立誠信、珍惜誠信，可以讓我們更加專注于處理自己的事情，也讓事情處理起來更加簡單、高效。
4.關(guān)愛生命尊重與關(guān)愛生命，是我們職責，也是我們的發(fā)展動力。我們守護自己與家人，快樂工作，享受生活;我們珍視生存的世界，崇尚和諧、友善的人際關(guān)系;熱愛優(yōu)美、多彩的人居環(huán)境。