近日，藝人徐熙媛（大 S）不幸離世讓我們深刻意識到感染性疾病的嚴重性和復雜性。尤其是當感染引發(fā)如敗血癥等嚴重并發(fā)癥時，對生命健康會構成巨大威脅。在與敗血癥等疾病的斗爭中，醫(yī)學技術的不斷進步為我們帶來了新的希望，其中 FIDA 技術就是一項極具潛力的工具。

       敗血癥（膿毒癥）是一種由感染引起的全身性炎癥反應綜合征，細菌、病毒等病原體入侵人體后，釋放毒素引發(fā)身體的過度免疫反應，可導致多器官功能障礙甚至衰竭，嚴重威脅患者生命。在敗血癥的診斷和治療過程中，準確快速地檢測和評估至關重要。

       FIDA，即層流誘導分散分析，是一種先進的分析技術。利用熒光檢測，通過分析選擇性配體（如 FITC - 標記的 S1P）與感興趣的分析物（患者血漿中的相關物質）結合時的拋物線流型，來測量表觀流體動力學半徑。在敗血癥（膿毒癥）的研究和診斷中，F(xiàn)IDA 有著獨特的優(yōu)勢：

• 在復雜環(huán)境中檢測精準：血漿是一個復雜的體系，存在著各種影響因素，但 FIDA 能夠在這樣的 “天然戰(zhàn)場” 中，直接對血漿樣本進行分析，不受血漿中多種因素干擾，有效檢測到與敗血癥相關的分子結合行為，例如可以檢測 S1P - FITC 與血漿中的 HSA 和 HDL 的結合，為敗血癥的診斷提供關鍵信息。

• 非競爭檢測優(yōu)勢明顯：與傳統(tǒng)的競爭結合檢測方法不同，F(xiàn)IDA 無需引入競爭分子，能夠更真實地反映體內分子的結合情況，為我們提供更準確的 KD 值等數(shù)據(jù)，有助于深入了解敗血癥相關分子機制，為精準診斷和治療方案的制定提供有力支持。

• 多種檢測方法靈活應用：FIDA 有預孵育（PreMix）、毛細管混合（CapMix）和復合物解離（CapDis）等多種方法。以 CapMix 和 CapDis 方法為例，它們有著標準化的操作流程，從毛細管的清洗、平衡，到樣本的填充、混合和檢測，每一個步驟都經(jīng)過精心設計，確保結果的準確性和可靠性，可針對不同的臨床需求和樣本特點，選擇最合適的檢測方法。

       雖然目前 FIDA 技術在敗血癥的應用中還存在一些局限性，比如所使用的 S1P - FITC 作為指示劑可能不能完全精確地反映內源性 S1P 的結合行為，且相關研究的樣本量還有待進一步擴大，但它已經(jīng)展現(xiàn)出了巨大的潛力。相信隨著研究的不斷深入和技術的持續(xù)改進，F(xiàn)IDA 將在敗血癥（膿毒癥）的早期診斷、病情監(jiān)測和治療效果評估等方面發(fā)揮越來越重要的作用，為更多敗血癥（膿毒癥）患者帶來生的希望，幫助我們在與敗血癥（膿毒癥）這場無聲的戰(zhàn)斗中取得更大的勝利，讓更多的生命得到及時的拯救和守護。

       讓我們記住大 S 的離去，也關注醫(yī)學技術的進步，期待 FIDA 等新技術能為敗血癥（膿毒癥）的防治帶來更多突破，為人類的健康事業(yè)做出更大貢獻。

以下為文章內容梳理

實驗設計  / FIDA

1. 實驗材料：

• 指示劑：50 nM 或 500 nM 的異硫氰酸熒光素標記的 1 - 磷酸鞘氨醇（S1P - FITC） 。

• 分析物：健康志愿者、手術創(chuàng)傷患者、敗血癥患者和感染性休克患者的血漿，使用時稀釋至 10% ，部分實驗使用 Plasbumin - 20 HSA和不同濃度的 HDL 。

• 儀器：FIDA 1 儀器，激發(fā)波長為 480 nm，發(fā)射波長 > 515 nm 。

2. 實驗方法：

• 毛細管混合（CapMix）法：用于檢測 S1P - FITC 與 HSA 的結合。在該方法中，指示劑和分析物在毛細管流動過程中直接混合。

• 復合物解離（CapDis）法：用于檢測 S1P - FITC 與 HDL 的結合。此方法中，指示劑和分析物在 FIDA 測量前預孵育（>10 min），然后用 PBS 將其推送通過毛細管。

3. 實驗分組：

• 健康對照組：14 名健康志愿者。

• 手術創(chuàng)傷組：11 名術后患者。

• 敗血癥組：36 名敗血癥患者。

• 感染性休克組：16 名感染性休克患者。

實驗結果  / FIDA

1. 結合曲線與解離常數(shù)（KD）：

• S1P-FITC與HSA：使用CapMix 法，以50 nM S1P-FITC為指示劑，與HSA反應生成結合曲線，測得解離常數(shù)KD為20 μg/mL 。

• S1P-FITC與HDL：運用CapDis 法，采用500 nM S1P-FITC作為指示劑，與HDL反應得到結合曲線，得出KD為1.25 mg/mL 蛋白質 。同時，僅使用熒光素時，在相應濃度下未觀察到特異性結合，證明了S1P與HDL和HSA結合的特異性 。

2. 區(qū)分S1P-HDL和S1P-HSA結合復合物：

• CapMix法：以50 nM S1P-FITC為指示劑，結果顯示無論HDL濃度如何，低濃度HSA都會導致流體動力學半徑（Rh）顯著下降，表明該方法測定的S1P-FITC與HSA的復合物形成具有濃度依賴性，且不受HDL濃度影響 。

• CapDis法：以500 nM S1P-FITC為指示劑，隨著HDL濃度的增加，Rh顯著增加，同時較低的HSA濃度仍會使Rh降低，說明該方法測定的Rh同時依賴于HSA和HDL的濃度。

3. 患者樣本中 S1P - HDL 和 S1P - HSA 復合物的形成：

• S1P - FITC 與 HSA 結合：使用 CapMix 法，在手術創(chuàng)傷、敗血癥和感染性休克患者 10% 血漿中，與健康對照組相比，指示劑 S1P - FITC 與 HSA 的結合顯著減少，且感染性休克患者比手術創(chuàng)傷患者的結合減少更明顯。所有患者中 S1P - FITC 與 HSA 的結合減少與疾病嚴重程度（通過 SOFA 評分衡量）無關 。

• S1P - FITC 與 HDL 結合：運用 CapDis 法，手術創(chuàng)傷和敗血癥患者 10% 血漿中 S1P - FITC 與 HDL 的結合同時增加，感染性休克組的復合物大小差異很大。所有患者中 S1P - FITC 與 HDL 的結合增加與 SOFA 評分無關 。

• 結合轉移：通過用 CapMix 法測定的 S1P - FITC 與 HSA 結合的 Rh 減去 CapDis 法測定的 S1P - FITC 與 HDL 結合的 Rh，結果表明在健康對照組中 S1P - FITC 主要與 HSA 結合，而在手術創(chuàng)傷、敗血癥和感染性休克患者中，其結合對象轉變?yōu)?HDL 。這種結合轉移與 SOFA 評分無關，且 FIDA 結果與 LC - MS/MS 數(shù)據(jù)相符，即 FIDA 測定的 Rh 與內源性 S1P 結合 HSA 或 HDL 的相對量呈正相關 。

4. 與臨床數(shù)據(jù)的相關性：

• 載體分子濃度：與對照組相比，患者血漿中 HSA 和 HDL 的濃度均顯著降低，感染性休克患者血漿中這兩種物質的含量最低 。

• 與臨床指標相關性：在感染性休克患者和高 SOFA 評分患者中，通過 CapDis 法得到的 S1P - FITC/HDL 復合物大小呈異質性分布。所得的 Rh 與機械通氣需求呈顯著負相關，與生存率呈正相關。而 C 反應蛋白（CRP）雖能預測感染性休克和高 SOFA 評分患者的機械通氣需求，但無法區(qū)分患者的存活情況 。

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參考文獻：Rapid determination of sphingosine 1-phosphate association with carrier molecules by flow-induced dispersion analysis to predict sepsis outcome，Volume 27, Issue 11111168 November 15, 2024 Open Access