ATP與ATP酶:
ATP酶,又稱(chēng)為三磷酸腺苷酶,是一類(lèi)能將三磷酸腺苷(ATP)催化水解為二磷酸腺苷(ADP)和磷酸根離子的酶,這是一個(gè)釋放能量的反應(yīng)。在大多數(shù)情況下,能量可以通過(guò)傳遞而被用于驅(qū)動(dòng)另一個(gè)需要能量的化學(xué)反應(yīng)。這一過(guò)程被所有已知的生命形式廣泛利用。
部分ATP酶是內(nèi)在膜蛋白(Integral membrane protein),可以錨定在生物膜上,并可以在膜上移動(dòng);這些ATP酶又被稱(chēng)為跨膜ATP酶?缒TP酶可以為細(xì)胞輸入許多新陳代謝所需的物質(zhì)并輸出毒物、代謝廢物以及其他可能阻礙細(xì)胞進(jìn)程的物質(zhì)。例如,鈉鉀ATP酶(又稱(chēng)為鈉/鉀離子ATP酶)能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈉/鉀離子的濃度,從而保持細(xì)胞的靜息電位;氫鉀ATP酶(又稱(chēng)為氫/鉀離子ATP酶或胃質(zhì)子泵)可以使胃內(nèi)保持酸化環(huán)境。
具有ATP酶活性的蛋白有:
①離子泵:鈉鉀泵,質(zhì)子泵,鈣泵等
②肌球蛋白——橫橋
③軸漿運(yùn)輸中的驅(qū)動(dòng)蛋白(順向)和動(dòng)力蛋白(逆向)
GTP和GTP酶:
鳥(niǎo)苷-5'-三磷酸,(GTP),是一類(lèi)嘌呤類(lèi)核苷三磷酸,它可以在DNA復(fù)制期間的DNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程中作為RNA生物合成的底物。它的結(jié)構(gòu)與含氮堿基鳥(niǎo)嘌呤相似,唯一的不同是GTP連有一個(gè)核糖基團(tuán)以及三個(gè)磷酸基團(tuán),其中,鳥(niǎo)嘌呤與核糖基團(tuán)的1位碳相連,磷酸基團(tuán)與核糖基團(tuán)的5位碳相連。
另外,GTP還能在生物體代謝過(guò)程中作能量源或底物活化劑,這一點(diǎn)和ATP(三磷酸腺苷)相似,不過(guò),它的專(zhuān)一性較強(qiáng),GTP一般在蛋白質(zhì)生物合成以及糖異生過(guò)程中作能量源。
GTP在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中起不可或缺的作用,特別是和G蛋白作用時(shí)以及在第二信使機(jī)制中,在GTP酶的催化作用下,GTP會(huì)轉(zhuǎn)化為GDP(二磷酸鳥(niǎo)苷)。
GTP主要在以下幾個(gè)生物過(guò)程中起著重要作用:
能量轉(zhuǎn)化
GTP參與細(xì)胞中的能量轉(zhuǎn)化過(guò)程,比如,在三羧酸循環(huán)中,一種酶能產(chǎn)出GTP分子。這也相當(dāng)于產(chǎn)生了一分子的ATP,因?yàn)镚TP能被核苷二磷酸激酶(NDK)轉(zhuǎn)化為ATP分子。
基因轉(zhuǎn)譯
在轉(zhuǎn)譯過(guò)程中,GTP作為氨酰tRNA與核糖體A位點(diǎn)結(jié)合、核糖體在mRNA上自5'端向3'端轉(zhuǎn)位等過(guò)程的能量源。
微管聚合及解聚在微管聚合過(guò)程中,每一個(gè)異質(zhì)二聚體都由攜帶兩分子GTP的α-tubulin和β-tubulin分子組成。這些分子攜帶的GTP會(huì)在二聚體加到延伸中的微管正端時(shí)水解。上述GTP水解對(duì)微管生成并不是必須的,但似乎只有與GDP結(jié)合的微管蛋白可以解聚。因此,不難推測(cè),一個(gè)GTP結(jié)合微管蛋白在微管尖端作為一個(gè)“帽”來(lái)防止解聚。一旦這個(gè)GTP分子水解,微管就會(huì)開(kāi)始解聚,并迅速縮短。
線粒體功能
蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)位進(jìn)入線粒體基質(zhì)的過(guò)程需要與GTP和ATP的相互作用。這些蛋白質(zhì)的進(jìn)入對(duì)線粒體內(nèi)幾個(gè)調(diào)節(jié)通路來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。
具有GTP酶活性的蛋白有:
①G蛋白
②小G蛋白(Ras蛋白:酪氨酸激酶受體-TPK-Ras-MAPK通路)
③蛋白質(zhì)合成過(guò)程中的某些起始因子,延長(zhǎng)因子,終止因子
④視桿細(xì)胞外段膜盤(pán)上的轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Gt屬于G蛋白
ATP酶和GTP酶是一類(lèi)分別能催化ATP或GTP分解為ADP或GDP和磷酸鹽離子的酶。這些酶在能量運(yùn)輸、信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞分化中起著關(guān)鍵的作用。
無(wú)機(jī)磷酸根(Pi):
無(wú)機(jī)磷酸根(Pi)是生物系統(tǒng)中最重要的離子之一,它具有多種作用。它最重要的作用之一是作為分子開(kāi)關(guān),通過(guò)介導(dǎo)生物系統(tǒng)中各種蛋白激酶和磷酸酶來(lái)開(kāi)啟和關(guān)閉酶的活性。無(wú)機(jī)磷酸鹽最普遍是以一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)、脫氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)的形式出現(xiàn),且可以經(jīng)由水解ADP或ATP而被釋放出來(lái)。
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) |
ATPase Kinetic ELIPA Assay Kit ELIPA ATP酶活性檢測(cè)試劑盒(動(dòng)態(tài)法) |
(Cat#BK051) |
GTPase Kinetic ELIPA Assay Kit ELIPA GTP酶活性檢測(cè)試劑盒(動(dòng)態(tài)法) |
(Cat#BK052) |
HTS Kinesin ATPase Endpoint Assay 高通量驅(qū)動(dòng)蛋白ATP酶活性檢測(cè)試劑盒(終點(diǎn)法) |
(Cat#BK053) |
Kinesin ELIPA kit (BK060) ELIPA 驅(qū)動(dòng)蛋白ATP酶檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)無(wú)機(jī)磷酸鹽測(cè)定) |
(Cat#BK060) |
CytoPhos Phosphate Assay CytoPhos 磷酸鹽檢測(cè)試劑盒 |
(Cat#BK054) |
PhosFree Phosphate Assay Biochem Kit PhosFree磷酸鹽檢測(cè)生化試劑盒(終點(diǎn)法) |
(Cat#BK050) |
GAP Assay Kit GAP檢測(cè)試劑盒 |
(Cat#BK105) |
ATP酶和GTP酶 分別催化ATP和GTP釋放出游離磷酸(P i),BK050,BK051,BK052,BK053和BK054都是通過(guò)與報(bào)告染料結(jié)合或通過(guò)酶轉(zhuǎn)化為報(bào)告分子來(lái)測(cè)量釋放的磷酸鹽以檢測(cè)酶促反應(yīng)的過(guò)程,BK051,BK052,BK053,BK054均適用于高通量篩選。
其中BK053和BK054( P i檢測(cè)限為1 µM)適用于更高活性的測(cè)定,例如微管誘導(dǎo)的驅(qū)動(dòng)蛋白ATPase或F-Actin誘導(dǎo)的肌球蛋白ATPase的檢測(cè)。為了特異性檢測(cè)G蛋白水解GTP的過(guò)程,我們還開(kāi)發(fā)了BK105。
BK051,BK052和BK060(P i檢測(cè)限為7 µM )適用于Vmax或Kcat測(cè)定,這需要對(duì)酶活性進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量,這些試劑盒需要中到高水平的ATPase或GTPase活性才能具有足夠的靈敏度。
Cytoskeleton公司成立于1993年,專(zhuān)注于生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)。公司提供藥物篩選、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄后修飾(PTM)、細(xì)胞骨架研究相關(guān)的系列試劑盒和產(chǎn)品,尤其以細(xì)胞骨架相關(guān)研究見(jiàn)長(zhǎng),既能滿(mǎn)足于樣品較少的科學(xué)研究,也可以用于小規(guī)模篩選研究和高通量大規(guī)模篩選研究。此外,公司還提供微管蛋白,肌動(dòng)蛋白,小G蛋白,GAPs,GEFs等現(xiàn)有產(chǎn)品的藥物篩選服務(wù)。
作為Cytoskeleton在中國(guó)的區(qū)代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供最全面的Cytoskeleton產(chǎn)品與服務(wù)。