許多膽堿能藥物已被用于分析特定的突變體和行為;然而，對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)神經(jīng)生物學(xué)影響最大的兩種藥物是涕-滅-威和左旋咪唑。使用WMicrotracker SMART，可以很容易地量化乙酰膽堿通道調(diào)節(jié)劑的作用和動(dòng)力學(xué)，以及其他參與行為的神經(jīng)元通道。WMicrotracker SMART是我們的新技術(shù)，通過(guò)它你可以獲得小動(dòng)物種群在時(shí)間和空間上的行為的詳細(xì)信息，包括多蠕蟲(chóng)路徑跟蹤。下面我們給出一個(gè)應(yīng)用程序示例。

P35中左旋咪唑?qū)π沱愲[桿線蟲(chóng)麻痹的動(dòng)力學(xué)研究
 
WMicrotracker SMART能夠獲取并繪制一群蠕蟲(chóng)的路徑跟蹤，實(shí)時(shí)計(jì)算平均移動(dòng)速度。左旋咪唑濃度處理(0至200uM)的動(dòng)力學(xué)圖如下所示。圖中顯示了左旋咪唑濃度與運(yùn)動(dòng)速度下降的相關(guān)性。

利用每小時(shí)5分鐘的采集延時(shí)，WMicrotracker SMART能夠量化左旋咪唑麻痹對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)的影響。

Protocol步驟：

1，在NGM培養(yǎng)皿中同步培養(yǎng)日1蟲(chóng)成蟲(chóng)種群(OP50)。
2，用M9緩沖液將蠕蟲(chóng)從培養(yǎng)皿中取出，并將其轉(zhuǎn)移到無(wú)菌2ml微管中。
3，讓蟲(chóng)子靜下來(lái)。倒入上清，注意不要擾亂顆粒；
4，用2ml M9緩沖液進(jìn)行清洗。短暫搖動(dòng)或翻轉(zhuǎn)試管；
5，重復(fù)上述步驟。把上清倒掉；
6，加入2ml M9緩沖液；
7，計(jì)算10µl內(nèi)的蟲(chóng)數(shù)，一式三份，計(jì)算平均值；
8，準(zhǔn)備懸浮液，得到[25蟲(chóng)/10µl]；
9，將10µl蠕蟲(chóng)溶液轉(zhuǎn)移到35mm板上，等到水滴被吸收。
10，5分鐘后，在5分鐘內(nèi)使用WMicrotracker SMART注冊(cè)蠕蟲(chóng)活動(dòng)。在獲取之前，通過(guò)對(duì)平板進(jìn)行機(jī)械刺激來(lái)刺激蠕蟲(chóng)。

微孔板準(zhǔn)備：

按照標(biāo)準(zhǔn)程序制備N(xiāo)GM；
在加入鹽和膽固醇后立即將左旋咪唑加入55°C的NGM瓊脂溶液中；
左旋咪唑板未接種OP50；
測(cè)定是在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前已將模板降到室溫的板上進(jìn)行的；
在將蠕蟲(chóng)添加到每個(gè)板之前，在每個(gè)板的邊緣做一個(gè)100mm硫酸銅環(huán)，以防止蠕蟲(chóng)爬出瓊脂；
當(dāng)添加蠕蟲(chóng)時(shí)，要小心不要刮傷瓊脂-蠕蟲(chóng)往往會(huì)爬進(jìn)瓊脂表面的任何裂縫；

在本實(shí)驗(yàn)中，我們觀察了左旋咪唑處理在NGM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的秀麗隱桿線蟲(chóng)群體中的動(dòng)力學(xué)效應(yīng)。

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