探討ELISA樣品稀釋倍數(shù)如何確定:
首先你要明確你要測的樣品的表達情況。如果低的話,那你就得可以先用一兩個孔,把你的樣品原液稀釋為一倍,五倍,做個預(yù)實驗不用去測熒光表達,在加完終止液后直接觀察顏色加好,然后確定你樣品檢測時的濃度.如果樣品中要檢測物質(zhì)的表達較高,那么預(yù)實驗室時可以適當?shù)亩嘞♂屢幌?五倍,十倍,十五倍,最多二十就差不多了.不過呢,在最終確定濃度時并不一定就是以上西式的濃度,可以去他們之間的數(shù)值的。出現(xiàn)上述情況可能的原因:
1、樣品稀釋
2、從低濃度到高濃度加樣,不換槍頭
3、標準曲線的形狀。落在高吸光值區(qū)間,稍一點偏差對結(jié)果影響就很大。因此在稀釋倍數(shù)準確的情況下,落在標準曲線變化急劇區(qū)域數(shù)據(jù)更準確。即吸光值小的部分結(jié)果準確。
1、2現(xiàn)在基本可以排除。這兩次進行了自認為非常充分的稀釋過程。之前加樣也是低濃度到高濃度不換槍頭。所以,3的可能性比較大。