多克隆抗體和單克隆抗體之間的主要用途及應用區(qū)別
瀏覽次數(shù):1416 發(fā)布日期:2022-8-23
來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
什么是
單克隆抗體?
單克隆抗體定義:與靶抗原上的特定表位結合的一種(單一)抗體構成單克隆抗體。
單克隆抗體生產
為了產生單克隆抗體,是將免疫原注射到宿主動物中。一旦免疫原引起免疫反應,脾臟中的 B 細胞就會被提取出來并與骨髓瘤細胞(癌細胞 B 細胞)融合。
健康的脾細胞不會在細胞培養(yǎng)中無限期地存活,因此進行此融合過程以制造永生細胞系。通過該過程產生雜交瘤細胞系。
通過將脾臟中的單個 B 細胞融合并培養(yǎng)到它們自己的雜交瘤中,產生了所有產生相同特異性抗體的 B 細胞的單一培養(yǎng)物。
B 細胞將單克隆抗體分泌到細胞培養(yǎng)基中。在這里,它們被提取出來進行進一步的測試和純化。
單克隆抗體雜交瘤克隆的產生提供了穩(wěn)定的可再生抗體來源,確保每批與前一批相同。
為了產生一種分泌富含抗體的液體(稱為腹水)的腫瘤,也可以將雜交瘤注射到小鼠的腹腔中。
單克隆抗體的用途:
- 檢測特定抗原
- 檢測蛋白質家族的單個成員
- 在實驗/批次之間創(chuàng)建一致的結果
- 對背景較少的細胞進行染色——非常適合免疫組織化學、免疫細胞化學和免疫熒光實驗
- 量化蛋白質表達(例如流式細胞術或熒光激活細胞分選)
- 檢測分子構象的變化
- 檢測磷酸化狀態(tài)的變化
- 檢測 X 射線晶體學的目標
- 創(chuàng)建缺少特定細胞類型的動物模型
- 免疫療法
單克隆抗體不適用于:
- 基于同源性檢測跨物種的靶蛋白
- 檢測低水平的目標蛋白
- 檢測構象改變的蛋白質
多克隆 |
單克隆 |
具有不同抗原互補位的異質抗體群 |
具有一個互補位的特異性抗體的同源群體 |
非表位特異性 |
表位特異性 |
與相似抗原發(fā)生交叉反應的可能性增加 |
低交叉反應性 |
背景噪音的可能性增加 |
低背景噪音 |
批次變異性 |
相同的批次 |
開發(fā)成本低 |
開發(fā)成本高 |
快速生產(約 3 個月) |
生產緩慢(約 6 個月) |
許多宿主物種選擇 |
很少有宿主物種選擇 |
什么是多克隆抗體?
多克隆抗體定義:與靶抗原上許多不同表位結合的許多(多)不同抗體構成多克隆抗體。
多克隆抗體生產
將免疫原注射到宿主動物體內以產生多克隆抗體。動物中的免疫反應是由這種免疫原激活多個 B 細胞引起的,所有這些 B 細胞都針對免疫原上的特定表位。
大量具有不同互補位的抗體由此產生,因此對靶蛋白的親和力不同。
免疫后,可以直接從血清(去除凝血蛋白和紅細胞的血液)中使用這些多克隆抗體,或者將它們純化以獲得不含其他血清蛋白的溶液。
必須用抗原對新動物進行免疫以創(chuàng)建新批次,這意味著批次之間存在高度的可變性。
多克隆抗體的用途:
- 檢測具有高抗原同源性的已知或未知抗原亞型
- 檢測低水平的特定抗原
- 盡可能多地捕獲抗原(例如免疫沉淀或染色質免疫沉淀)
- 檢測變性蛋白質
- 檢測具有可能的遺傳多態(tài)性、糖基化或構象變化的靶標
- 跨多種檢測類型檢測天然蛋白質
- 在不同 pH 值和鹽濃度的溶液中檢測目標
多克隆抗體不適用于以下領域:
- 定量實驗,例如流式細胞儀,由于多個結合位點導致信號放大,會導致不正確的結果
- 與高同源蛋白存在交叉反應問題的情況
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