逐典Pannarase全能核酸酶作為一種非特異性核酸內(nèi)切酶，展現(xiàn)出了獨(dú)特的優(yōu)勢。其來源于Serratia marcescens，能夠在多種條件下高效降解各種形式的DNA和RNA，生成特定大小的寡核苷酸殘基片段。這種酶對核酸堿基序列沒有特異性要求，意味著它可以在核酸鏈內(nèi)的任意位置進(jìn)行切割，從而大大提高了去除殘留核酸的效率。
 

Q1:使用過程中，如何保證讓酶活力處于最佳？

A:pH和溫度控制很重要，最適pH在8.0，不過6-10之間也可使用，最高活性溫度是37℃，酶活性溫度范圍0~42°C。

Q2:關(guān)于存放問題，如果臨時使用會不會影響后期？

液體有效期為1年。打開包裝使用后，如果在 2～8ºC 環(huán)境下放置超過1周時間，建議過濾除菌，防止微生物污染。

Q3：樣品中含有EDTA，鹽酸胍等成分，我們需要注意什么？

常用試劑對全能核酸酶的活性有抑制作用，反應(yīng)條件不適合容易加長反應(yīng)時間，影響實(shí)驗進(jìn)度

Q4:不同應(yīng)用途徑中應(yīng)該添加多少全能核酸酶比較合適呢？

具體的核酸酶添加量會根據(jù)不同的實(shí)驗用途而有所不同，以下是一些簡單參考，具體操作和數(shù)據(jù)調(diào)整還需要經(jīng)過實(shí)驗驗證：

真核細(xì)胞裂解液：為了降低細(xì)胞裂解液黏度，縮短處理時間，改善分離效果，可以參考細(xì)胞數(shù)來添加。比如一般為106~107個細(xì)胞添加1μl即500單位的核酸酶。

純化后的疫苗病毒：由于DNA含量較少，可以按照萬分之一到萬分之五也就是每毫升5個單位的最終濃度加入。

Q5：哪些緩沖液可以用于稀釋？

稀釋液緩沖液: 20 mM Tris-HCl（pH 8.0），2 mM MgCl2，20 mM NaCl。不需要無菌的可以直接加入，若有無菌要求，建議將酶用buffer稀釋，然后用0.2μm的膜除菌過濾后加入。酶被稀釋后盡快用掉，避免反復(fù)凍融。

Q6.倘若反應(yīng)溫度無法達(dá)到最適溫度37℃，如何保證核酸酶消化效果佳？

當(dāng)反應(yīng)溫度過低的情況下，推薦延長反應(yīng)時間來保證消化效果。

Q7.實(shí)驗過程中遇到需要蛋白變性環(huán)境，對核酸酶是否有影響？

在問題三中已列舉出如SDS、尿素等試劑都會影響到核酸酶的酶活，隨著濃度與時間的增加，核酸酶會出現(xiàn)變性失活，可通過控制抑制劑濃度范圍及提高核酸酶濃度來補(bǔ)償抑制因素影響。

Q8.核酸酶的使用時間

可以選擇在細(xì)胞收獲前、澄清后或是純化后用廣譜核酸酶處理樣品，一般選擇在收獲前或澄清后處理，可以提高病毒得率。

早期使用：可以減少大的DNA片段，并且可以在下游純化步驟中去除殘留的核酸酶。 但為了去除樣品中大量的核酸，必須使用大量的酶。

后期使用：節(jié)約了核酸酶的用量，降低成本；但必須增加一個去除廣譜核酸酶殘留的步驟，并且，采用這種方式可能會導(dǎo)致病毒的得率減少。

逐典Pannarase全能核酸酶優(yōu)勢：

1.無動物源性、無氨芐青霉素

2.杰出單位比酶活、更高效的核酸降解能力

3.先進(jìn)的生產(chǎn)工藝，非傳統(tǒng)His標(biāo)簽純化、排除引入金屬離子風(fēng)險

4.嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)毒水平低，確保單位酶活的準(zhǔn)確性以及批次間穩(wěn)定性

全能核酸酶應(yīng)用條件：

全能核酸酶的酶活會受到多種因素的影響（例如溫度、pH、離子強(qiáng)度等），故用量范圍也會從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環(huán)境下酶的最佳濃度不同，需要通過實(shí)驗設(shè)置梯度進(jìn)行最佳條件的摸索。

應(yīng)用實(shí)例：

1.樣品：狂犬病毒濃縮液

處理條件:核酸酶濃度50~90U/ml ,

37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h

 

 

2.樣品：狂犬病病毒濃縮液

處理條件：25、50和100 U/ml，37℃

 

3.樣品：流感病毒濃縮液

處理條件：10 U/mL，37℃