ELISA試驗(yàn)過(guò)程氣泡產(chǎn)生的原因和避免方法
瀏覽次數(shù):222 發(fā)布日期:2024-4-8
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氣泡在酶標(biāo)板實(shí)驗(yàn)過(guò)程中是一個(gè)常見(jiàn)的現(xiàn)象,它們的存在可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生顯著的影響。為了確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性,了解氣泡的形成原因、影響以及如何避免它們至關(guān)重要。通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周?chē),?dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。在做實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中,有時(shí)為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產(chǎn)生氣泡。
ELISA試驗(yàn)產(chǎn)生氣泡原因:
1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周?chē),?dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸。
2.孔內(nèi)反應(yīng)不均一。
3.包被時(shí)有氣泡的話,將導(dǎo)致包被不完全實(shí)際包被量下降--弱陽(yáng)性甚至假陰性。
4.封閉時(shí)有氣泡的話,將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點(diǎn)的存在,引起非特異性結(jié)合--本底增高,假陽(yáng)性。
5.加樣時(shí)有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽(yáng)性甚至假陰性。
6.加二抗時(shí)有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽(yáng)性甚至假陰性(競(jìng)爭(zhēng)法相反----假陽(yáng)性)。
7.加顯色液時(shí)有氣泡的話---顯色不完全。
8.加終止液時(shí)有氣泡的話(1、不能完全終止反應(yīng) 2、影響酶標(biāo)儀比色,OD值增高)
9.洗滌時(shí)有氣泡的話,非特異性結(jié)合物不能完全洗去,做無(wú)用功。
避免方法:
1.加樣時(shí)盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過(guò)快過(guò)猛。
2.封閉時(shí)一定要加滿孔。
3.洗滌時(shí)一定要加滿孔(重要),氣泡會(huì)浮上來(lái)*終驅(qū)除。手工洗板時(shí)一定要吸干水分并用力拍干。