非酒精性脂肪性肝模型

非酒精性脂肪性肝�。∟onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是常見的肝臟疾病之一，患者的脂肪在肝臟中過度累積，這種堆積不是由大量飲酒引起的；非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis, NASH）則是該疾病的亞型。NAFLD/NASH的臨床前動物模型有飲食誘導、化學物質誘導等。賽業(yè)生物可提供多種非酒精性脂肪肝小鼠模型及表型分析服務，同時也可根據(jù)實際情況定制研究人員需要的動物模型。

飲食誘導小鼠模型
給予動物高脂、高糖飼料喂養(yǎng)建立的脂肪肝模型，其主要發(fā)病機制是營養(yǎng)過剩，食物中脂類、膽固醇或糖類過量，無法完全吸收利用，脂類堆積于肝而引發(fā)脂肪肝，進一步出現(xiàn)肝炎性改變及纖維化。該模型與人類發(fā)病相似，是最常見的NAFLD動物模型。賽業(yè)生物通過高脂高膽固醇高果糖飼料（GAN）喂養(yǎng)構建的NASH小鼠模型，可作為闡明非酒精性脂肪肝的病理生理機制以及新藥的開發(fā)的動物模型。
 

使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導的NASH模型的體重及血生化檢測

結果顯示：建模30周時，NASH組小鼠的體重、6h空腹血糖值、血清中ALT、AST和TC濃度均顯著高于對照組。
 

使用GAN高脂高膽固醇高果糖飲食誘導的NASH模型的病理切片及NAS評分

結果顯示：造模26周后，與對照組相比，NASH組小鼠的肝組織出現(xiàn)了明顯的脂肪變性、氣球樣變與纖維化。此外，NASH組小鼠的NAS評分從造模后第16周開始，均達到了5分，與對照組差異顯著，NASH小鼠造模成功。

化學物質誘發(fā)模型
四氯化碳（CCl4）可造成肝損傷，可單獨施用或配合高脂飲食來誘發(fā)脂肪肝或肝纖維化。其機制主要是CCl4誘導肝臟發(fā)生氧化應激反應，導致有害的脂質和蛋白質過氧化產(chǎn)物不斷產(chǎn)生和積累，并發(fā)生嚴重的壞死反應，從而導致肝細胞結構和功能破壞。

1.誘導肝纖維化和肝硬化
CCl4誘導的小鼠肝纖維化和肝硬化在許多方面反映了與毒性損傷相關的人類疾病模式，α-SMA表達、星狀細胞活化和關鍵基質成分（包括膠原蛋白-1、基質金屬蛋白酶及其抑制劑TIMPs）等已在該模型的發(fā)病機制中得到證實。CCl4誘導在肝臟中引起可重現(xiàn)的和可預測的纖維化反應，使其成為抗纖維化和抗肝硬化治療的臨床前藥理學研究和肝纖維化-肝硬化-肝癌變化的病理生理學研究的寶貴基礎。
 

WD和CCl4處理過的小鼠與人類NASH的組織學比較^[1]

2.誘導肝損傷
CCl4誘導肝損傷模型是一種廣泛應用于肝臟病理研究的模型，其形態(tài)學和生化特征與人類肝臟疾病細胞病變相似。單劑量CCl4可導致中心部位壞死和脂肪變性，而長期給藥可導致肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌（HCC）。研究人員構建了使用急慢性CCl4誘導的肝損傷模型并使用多種評估手段來評估新藥與新療法的療效。
 

對照組與實驗組的肝臟標本進行天狼星紅染色^[2]
 

異種移植肝癌模型

異種移植肝癌模型是將不同種屬來源的腫瘤細胞株移植到動物上所構建的模型，可分為異種皮下移植、原位移植等。其中，人源的異種皮下移植即把人源腫瘤細胞或組織移植于模型動物的腋窩、背部皮下等部位，這類方法有成瘤時間快、成模周期短、瘤體觀察方便的優(yōu)點，常用于篩選抗癌新藥，是研究腫瘤細胞增殖以及體內(nèi)篩選藥物最常用的模型之一。

制備此類肝癌模型，可用肝癌細胞（如HuH7、Hep G2、NCI-H1299）接種到小鼠腋窩、背部皮下等部位進行建模，或者腫瘤組織先在免疫缺陷鼠皮下荷瘤，成功后再將腫瘤組織小塊移植到小鼠的皮下進行建模。賽業(yè)生物可為您提供多種小鼠皮下移植肝癌模型以及相應的藥效學服務。

小鼠肝癌細胞Hep G2皮下移植腫瘤及體重生長曲線
 

自發(fā)肝癌小鼠模型

自發(fā)性肝癌模型是指實驗動物未經(jīng)人工處置，在人工創(chuàng)造的環(huán)境中所發(fā)生的腫瘤。這種模型最大的優(yōu)點就是排除了人為因素的干擾，較好還原了動物模型在自然條件下的發(fā)病情況。賽業(yè)生物構建的Alb-Cre+/MYC+小鼠模型（產(chǎn)品編號：C001339），即可用于肝癌發(fā)生發(fā)展機制、藥物篩選及療效評價等相關研究。

Alb-Cre+/MYC+小鼠通過H11-CAG-LSL-hMYC-IRES-EGFP小鼠與Alb-Cre小鼠交配獲得。MYC基因是一種原癌基因，其編碼的核蛋白在細胞周期進程、細胞凋亡和細胞轉化中發(fā)揮重要作用。Alb-Cre介導的重組導致H11-CAG-LSL-hMYC-IRES-EGFP小鼠的轉錄終止序列l(wèi)oxp-Stop-loxp缺失并在肝臟中過表達人源MYC原癌基因。該模型可自發(fā)肝癌，發(fā)病時間較早。
 

Alb-Cre+/MYC+小鼠生存曲線

實驗結果顯示，50%的Alb-Cre+/MYC+小鼠在6周齡左右發(fā)生死亡。

Alb-Cre+/MYC+小鼠肝臟瘤體觀察

結果顯示，與正常小鼠相比，3周齡Alb-Cre+/MYC+小鼠肝臟腫瘤較小，10周齡腫瘤明顯增多且體積較大，發(fā)生明顯的病變。

參考文獻：
[1]Tsuchida, Takuma., Lee, Youngmin A., Fujiwara, Naoto., Ybanez, Maria.,  and Allen, Brittany.. "A simple diet- and chemical-induced murine NASH model with rapid progression of steatohepatitis, fibrosis and liver cancer." Journal of hepatology 69.2(2018):385-395.

[2]Scholten, D., Trebicka, J., Liedtke, C.,  and Weiskirchen, R.. "The carbon tetrachloride model in mice." Laboratory animals 49.1 Suppl(2015):4-11.