大家原代分離不同的器官和組織，運(yùn)用到了不同的膠原酶。這些膠原酶的種類和適用范圍大家都了解多少呢？

 

 

今天中喬新舟給大家介紹一下兩種原代分離常用的酶，希望對(duì)大家有幫助。如果說具體某一類組織中分離細(xì)胞需要用到的酶，希望大家多查閱文獻(xiàn)，自己在查的過程中一定能學(xué)習(xí)到更多有用的知識(shí)哦。
 

                                           膠原蛋白水解酶

      膠原蛋白水解酶(簡稱膠原酶，Collagenase)，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。

      膠原酶它是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為最終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞專用膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

1、膠原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì)胞，用于哺乳動(dòng)細(xì)胞的分離�！　�

2、膠原酶Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織。

3、膠原酶Ⅲ用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì)胞，用于哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞解離。

4、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。

5、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個(gè)細(xì)胞。

 

                                           胰蛋白酶
 

 

     胰蛋白酶(簡稱胰酶)是廣泛應(yīng)用的消化劑。胰蛋白酶是一種胰臟制品，對(duì)蛋白質(zhì)有水介作用，主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵，使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開，在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同，對(duì)細(xì)胞的消化能力也不同，胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的作用，取決于細(xì)胞類型、酶的活力、配制的濃度、消化的溫度、無機(jī)鹽離子、pH以及消化時(shí)間的長短等。（給大家推薦一下中喬新舟胰酶/EDTA消化液）

 

貨號(hào)：0103

 

細(xì)胞類型

      胰蛋白酶適于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織，能有效地分離肝、腎、甲狀腺、羊膜、胚胎組織、上皮組織等。而對(duì)含結(jié)締組織較豐富的組織，如 乳腺、滑膜、子宮、纖維肉瘤、腫瘤組織等就無效，但若與膠原酶合用，就能增加其對(duì)組織的分離作用。

 

酶的活力

      市售的胰蛋白酶，其活力都經(jīng)過測定而有效，但配制時(shí)必須新鮮，需保存在低溫冰箱中，消化時(shí)的pH和溫度都要適宜，否則會(huì)影響活力，細(xì)胞的分散直接與酶的活力有關(guān)，最終使用活力為1:200或1:250，56℃pH8.0時(shí)活力最強(qiáng)。

該酶為粉劑，保藏時(shí)要防潮，室內(nèi)溫度不宜過高，保存時(shí)間不能太長，若粉劑結(jié)團(tuán)塊，說明該部分受潮或失效。

 

酶的濃度

      胰蛋白酶一般采用的濃度為0.1%-0.25%(活力1:200或1:250)，但遇到難消化的組織時(shí)，濃度可適當(dāng)提高，消化時(shí)間適當(dāng)延長。濃度高對(duì)細(xì)胞有毒性，而較低濃度的胰蛋白酶在培養(yǎng)液中可促進(jìn)細(xì)胞的增殖，若培養(yǎng)液中加入血清，其少量胰蛋白酶可被血清中抗胰蛋白酶因子所清除。

 

溫度

      一般認(rèn)為胰蛋白酶在56℃時(shí)活性最強(qiáng)，但由于對(duì)細(xì)胞有損害而不能被采用，常使用的溫度為37℃，通常在37℃進(jìn)行消化比室溫作用快。

 

pH

      pH8~pH9是胰蛋白酶活力適宜范圍，但隨堿性的增加其活力也隨之減少，活性強(qiáng)分散快，細(xì)胞也容易被消化下來，消化分離細(xì)胞時(shí)PH只能選用7.6~8.0之間，否則對(duì)細(xì)胞有損傷。

 

無機(jī)鹽離子

      在配制時(shí)應(yīng)采用無鈣鎂離子的PBS配制，若用含有鈣和鎂的鹽類溶液來配制胰蛋白酶時(shí)，可以發(fā)生抑制胰蛋白的消化作用。

 

消化時(shí)間

      如果細(xì)胞消化時(shí)間過長，可以損害細(xì)胞的呼吸酶，從而影響細(xì)胞的代謝，一般消化時(shí)間為20分鐘為宜，冷消化時(shí)使用低濃度消化液，于4℃過夜也可。

    
                                胰蛋白酶和膠原酶生物活性的差別

 

胰蛋白酶和膠原酶在不同溫度下消化各種組織小塊時(shí)所需時(shí)間(小時(shí))(0.5~1cm3)
 

 

      鑒于胰蛋白酶和膠原酶的生物學(xué)活性和在不同濃度下消化各種組織小塊所需的時(shí)間（小時(shí)）有差異，以及兩者價(jià)格不等，有人采用膠原酶與胰蛋白酶并用，同時(shí)還可加透明質(zhì)酸酶（對(duì)細(xì)胞表面糖基有作用），采用兩者的聯(lián)合消化作用，對(duì)分散大鼠和兔肝、癌組織非常有效。

除上述兩種最常用的消化酶外，還有鏈霉蛋白酶、粘蛋白酶、蝸牛酶、彈性蛋白酶、木瓜蛋白酶，近年來，還有一種從灰霉菌中提取的Pronase新酶分散細(xì)胞更佳。