PCR試劑盒技術(shù)特點與注意事項
瀏覽次數(shù):309 發(fā)布日期:2021-9-6
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PCR試劑盒按方法可以分為普通PCR試劑盒(定性),熒光定量PCR試劑盒(定量)。熒光定量PCR試劑盒根據(jù)染料又分為SYBEGREEN法,探針法,等。根據(jù)模板的類型分為DNA類PCR試劑盒和RNA類PCR試劑盒 。
PCR試劑盒器材:1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
PCR試劑盒技術(shù)特點:
1、準確可靠,臨床雙盲對照試驗>1000例,結(jié)果與金標準測序法比對,結(jié)果*性大于99%。
2、高靈敏:可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3、快速:整個檢測流程只需3小時。
4、簡便:試劑盒提供預混好的試劑,使體系配置操作簡便。
5、防污染
6、高特異性:雙重特異性組成,保證檢測結(jié)果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需完全配對,才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對,在延伸中產(chǎn)生熒光。
PCR試劑盒使用及效果:
在無內(nèi)毒素試管中,加入100 uL細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液,或待測樣品。再加入100 uL鱟試劑溶液,混勻,37ºC溫育T1分鐘。溫育結(jié)束,加入100 uL顯色基質(zhì)溶液,混勻,37ºC溫育T2分鐘。溫育結(jié)束,加入500 uL偶氮化試劑1溶液,混勻,加入500uL偶氮化試劑2溶液,混勻加入500 uL偶氮化試劑3溶液,混勻,靜置5分鐘,于545nm波長處讀取吸光度值。
內(nèi)毒素標準范圍(EU/mL)為0.01-0.1,T1為60分鐘,T2為6分鐘;內(nèi)毒素標準范圍(EU/mL)為0.1-1,T1為10分鐘,T2為6分鐘。