重組蛋白常見的融合標(biāo)簽整理匯總

瀏覽次數(shù)：1507　發(fā)布日期：2021-6-29　來源：MedChemExpress

Q：什么是融合標(biāo)簽？

A：融合標(biāo)簽是指利用 DNA 體外重組技術(shù)，在目的蛋白 N 端或 C 端進(jìn)行融合表達(dá)的特定蛋白、多肽或寡肽標(biāo)簽。

Q：融合標(biāo)簽有什么作用？

A：重組蛋白通過融合標(biāo)簽與包被在固相基質(zhì)上的特異配基結(jié)合，使重組蛋白定向固定并得以純化，大大簡化了重組蛋白的檢測，同時(shí)既能保留天然蛋白的大部分結(jié)構(gòu)，又能實(shí)現(xiàn)增加溶解度，防降解，促進(jìn)分泌，便于純化等功能。

Q：融合標(biāo)簽的分子量和功能有關(guān)嗎？
A：蛋白融合標(biāo)簽的分子量越大，對(duì)蛋白質(zhì)本身的功能影響越大，所以大分子融合標(biāo)簽一般只用于檢測或蛋白純化等。常見的小分子量的融合標(biāo)簽，因其具有很多商品化的標(biāo)簽抗體，可以節(jié)省使用者制備目的蛋白的單克隆抗體的時(shí)間與成本。

Q：是否所有的融合標(biāo)簽都需要切除？

A：融合標(biāo)簽較小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，對(duì)蛋白質(zhì)的后續(xù)應(yīng)用和研究不會(huì)產(chǎn)生影響。但是有些大標(biāo)簽是需要切除的，例如：Dsb 蛋白、FkpA 蛋白、GST 蛋白、SUMO 標(biāo)簽等。

為了便于將重組蛋白的融合標(biāo)簽去除，在設(shè)計(jì)構(gòu)建載體時(shí)需要在標(biāo)簽蛋白和目的蛋白之間加上蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)，常用的蛋白酶位點(diǎn)有：HRV 3C 蛋白酶切位點(diǎn)、TEV 蛋白酶切位點(diǎn)、腸激酶切位點(diǎn)、SUMO 蛋白酶切位點(diǎn)等。

Q：融合標(biāo)簽加在 N 端或 C 端，有什么區(qū)別？
A：蛋白融合標(biāo)簽對(duì)于 N 端或 C 端的選擇性對(duì)重組蛋白的結(jié)構(gòu)與特性會(huì)造成一定的影響。例如，對(duì)于較難表達(dá)或較容易降解的蛋白，可將融合標(biāo)簽選擇在 5’ 端，可以提高重組蛋白的穩(wěn)定性，也可減小對(duì)重組蛋白的免疫原性。但是重組蛋白為分泌蛋白，在其分泌到高爾基體的過程中，處于 5’ 端的融合標(biāo)簽會(huì)隨著 5’ 端信號(hào)肽的切除而切除，從而失去作用。在目的蛋白結(jié)構(gòu)未知的情況下，可以分別于兩端構(gòu)建標(biāo)記的表達(dá)克隆，以確定哪個(gè)更有效。

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