今天百螢總結(jié)了AAT Bioquest研發(fā)的Tide Fluor和Tide Quencher兩類染料的特點(diǎn)、使用方法等，希望可以為還不知道如何選擇這兩類產(chǎn)品的小伙伴一些幫助。

什么是Tide Fluor、Tide Quencher染料?

Tide Fluor和Tide Quencher是一類磷酰胺染料和CPG載體，用于制備FRET寡核苷酸，它們是經(jīng)典染料（如FAM、HEX、TET和JOE）和優(yōu)質(zhì)低聚標(biāo)記染料的絕佳替代品。AAT Bioquest的Tide Fluor 染料（如TF1，TF2，TF3，TF4，TF5，TF6，TF7和TF8）具有比典型的熒光團(tuán)（如熒光素，羅丹明和花青素）更強(qiáng)的熒光性和更高的光穩(wěn)定性。我們的TF2的激發(fā)和發(fā)射波長與羧基熒光素（FAM）的激發(fā)波長和發(fā)射波長基本相同，這使其易于用于熒光素的生物學(xué)應(yīng)用，但TF2具有更強(qiáng)的性能。與FAM探針相比，TF2在生理條件下具有更強(qiáng)的熒光，并且光穩(wěn)定性更高。相比熒光素和Cy染料（如AlexaFluor® 和Cy3，Cy5和Cy7），Tide Fluor 染料具有更高的成本效益。

圖1.雜交誘導(dǎo)的分子信標(biāo)寡核苷酸探針的熒光增強(qiáng)對比，該探針包含Tide Fluor 染料作為供體或Tide Quencher 染料作為受體。

除了杰出的Tide Fluor 供體染料外，Tide Quencher FRET受體染料（例如TQ1，TQ2，TQ3，TQ4，TQ5，TQ6和TQ7）經(jīng)過優(yōu)化，可與我們的Tide Fluor 染料和經(jīng)典的熒光團(tuán)（例如AMCA，EDANS，F(xiàn)AM，TAMRA，HEX，JOE，TET，ROX，Cy3，Cy5和Cy7）配對。與我們的Tide Fluor 供體染料一樣，我們的Tide Quencher 受體染料與市場上其他同類產(chǎn)品相比，也具有更高的成本效益，可滿足您所需的生物學(xué)應(yīng)用。

為了方便研究，Tide Fluor 染料和Tide Quencher 染料擁有多種反應(yīng)形式。對于寡核苷酸的合成標(biāo)記，我們同時提供了Tide Fluor 和Tide Quencher 染料的亞磷酰胺及其CPG載體。對于寡核苷酸的后標(biāo)記，我們提供氨基反應(yīng)性和巰基反應(yīng)性的Tide Fluor 和Tide Quencher 水溶性染料。

Tide Fluor與Tide Quencher特點(diǎn)

Tide Fluor與Tide Quencher系列產(chǎn)品選擇指南

表1.Tide Fluor系列產(chǎn)品選擇指南

表2.Tide Quencher系列產(chǎn)品選擇指南

選擇FRET的供體和受體

供體分子和受體分子的選擇可以相同，也可以不同。在大多數(shù)應(yīng)用中，它們是不同的染料。FRET既可以通過受體敏化熒光的出現(xiàn)，也可以通過供體/受體的強(qiáng)度比變化（如果受體是熒光的）或供體熒光強(qiáng)度的降低來檢測。在后一種情況下，受體可以是熒光的或非熒光的。各種D/A對的Ro值可以明確的看出FRET的效率，F(xiàn)RET對的Ro值越大，F(xiàn)RET效率越高。熒光素/四甲基羅丹明對已被廣泛地用于開發(fā)FRET的分析。EDANS/DABCYL對已被廣泛用于開發(fā)FRET的核酸探針和蛋白酶底物。MCA（7-甲氧基香豆素-4-乙酸）和DNP（2，4-二硝基苯胺）是開發(fā)熒光探針的另一對供體/受體。與EDANS/DABCYL對相比，MCA/DNP對的熒光信號波長通常較短且較弱。然而，由于波長較小，MCA/DNP對往往表現(xiàn)出更好的親和力。DNP也是一種很好的FRET受體，與色氨酸（Trp）、2-氨基苯甲酸（Abz）或Abz衍生物（如Abz（N-Me））配對。

表3.一些D/A對的R_o值

表4.Tide Quencher 染料FRET應(yīng)用推薦

注.建議使用綠色標(biāo)記的FRET對，用青色標(biāo)記的對可以使用，但效率不如綠色對標(biāo)記。我們已經(jīng)驗證，這些推薦的FRET對在我們的蛋白酶和核酸檢測分析中已表現(xiàn)出高靈敏度和低背景。除FRET效率外，還需要考慮其他因素，例如pH，多路復(fù)用和緩沖液干擾等。