外泌小體（Exosome）是一種囊泡結(jié)構(gòu)，直徑通常在30-150nm，常見(jiàn)于正常體液和病理樣本，培養(yǎng)細(xì)胞也可分泌。研究人員已經(jīng)在血液、唾液、尿液、母乳等中發(fā)現(xiàn)外泌小體，其運(yùn)載的蛋白和核酸涉及其細(xì)胞間物資、信息交流，影響和調(diào)控著多方面的生理功能，包括腫瘤發(fā)生、免疫促進(jìn)、凋亡調(diào)控、血管生成、炎癥反應(yīng)及發(fā)育和分化等。由于在體液中出現(xiàn)，外泌小體對(duì)于臨床生物標(biāo)志物檢測(cè)特別有利，成為體外診斷、biomarker研究的新熱點(diǎn)。
 
 
 
分泌和膜出芽生成囊泡

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免疫調(diào)控

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神經(jīng)元-神經(jīng)膠質(zhì)通訊

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腫瘤演進(jìn)

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近年來(lái)隨著分離純化技術(shù)的提高，關(guān)于外泌小體的研究成果頗豐；這進(jìn)一步吸引了越來(lái)越多領(lǐng)域的課題將外泌體納入研究對(duì)象。研究的前提是方便、高效、標(biāo)準(zhǔn)化地分離純化外泌小體。經(jīng)過(guò)近20年的探索，已經(jīng)建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。
 
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經(jīng)典超速離心法制備外泌體

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超速離心法是制備外泌體的金標(biāo)方法，
但是有所局限：

• 設(shè)備非常昂貴
• 對(duì)經(jīng)驗(yàn)要求較高
• 操作時(shí)間長(zhǎng)，有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)

100,000×g離心，操作時(shí)長(zhǎng)超過(guò)5個(gè)半小時(shí)
 
在大量實(shí)踐中大家逐漸認(rèn)識(shí)到根據(jù)下游研究對(duì)樣品的要求，以及起始樣品的規(guī)模、數(shù)量，可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設(shè)備和試劑盒，對(duì)操作人員也沒(méi)有特別的經(jīng)驗(yàn)要求，超濾法后來(lái)居上，成為實(shí)驗(yàn)室中制備外泌體的通用方法。
 
 
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過(guò)濾+超濾
簡(jiǎn)單兩步，快捷制備外泌體
 

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根據(jù)起始樣品量選擇合適規(guī)格的過(guò)濾和超濾工具
 

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制備的外泌體用于細(xì)胞學(xué)或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前需要做無(wú)菌處理

Ultrafree離心式微濾管
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TIPS

• 無(wú)血清樣品選擇3KD孔徑為了盡可能提高外泌體的回收率。 
• 有血清樣品選擇100KD/500KD孔徑為了盡可能去除細(xì)胞分泌蛋白以及血清成分中的白蛋白影響。 
• 樣品體積大于30mL時(shí)可以考慮用超濾杯或Centricon 70，注意超濾杯在200mL以?xún)?nèi)時(shí)吸附損耗可能較超濾管有所增加。

 
 
不同方法制備外泌小體產(chǎn)量比較

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默克生命科學(xué)超濾法制備的外泌小體電鏡照片（放大倍數(shù)87000×)。小體直徑16 - 82nm，有些達(dá)到485nm。

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進(jìn)一步精制……
經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)便的“微濾澄清+超濾富集”兩步法，制備的外泌體可直接用于下游各種分析，如果需要純度更高的外泌體，可以采用抗體包被的瓊脂糖珠或磁珠進(jìn)一步純化。
 
抗體包被磁珠親和純化

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