今天，百螢為大家精選了AAT Bioquest市售的雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑，它有哪些產(chǎn)品？它與單波長(zhǎng)鈣指示劑有什么區(qū)別？它有什么優(yōu)勢(shì)？如何選擇五花八門的雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑？感興趣的小伙伴一起來(lái)看看吧！

雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑

與單波長(zhǎng)鈣指示劑相比，雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑具有獨(dú)特的光譜特性，這些光譜特性是響應(yīng)結(jié)合鈣而觸發(fā)的。當(dāng)與鈣結(jié)合時(shí)，比例指示劑的最佳吸收率或發(fā)射波長(zhǎng)強(qiáng)度都會(huì)發(fā)生變化。例如，雙激發(fā)鈣指示劑Fura-2，AM和Fura-8 ，AM在結(jié)合和不含鈣時(shí)均顯示兩個(gè)峰值激發(fā)波長(zhǎng)。當(dāng)分別在結(jié)合鈣的和無(wú)鈣的峰值激發(fā)波長(zhǎng)下激發(fā)時(shí)，鈣濃度的增加會(huì)引發(fā)雙激發(fā)指示劑的熒光發(fā)射強(qiáng)度的增加和減少。

雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑的優(yōu)勢(shì)：

• 比例測(cè)定可準(zhǔn)確測(cè)量細(xì)胞內(nèi)鈣濃度
• 減少不均勻的染料加載，染料滲漏，光漂白和變化的細(xì)胞厚度（在混合種群中常見(jiàn)）的影響
• 提供更可靠和可重復(fù)的結(jié)果
• 雙重激發(fā)或雙重發(fā)射的指示劑
• 活細(xì)胞鈣分析的細(xì)胞滲透形式（與成像，流式細(xì)胞儀和微孔板檢測(cè)（例如HTS）兼容）
• 細(xì)胞不滲透形式，可通過(guò)微量注射，貼片移液器等進(jìn)行上樣

圖1.測(cè)量CHO-K1細(xì)胞的ATP劑量響應(yīng)。使用Fura-2 AM（#21023）和Fura-8 AM（#21056）。將CHO-K1細(xì)胞以40,000個(gè)細(xì)胞/ 100 µL /孔在黑色96孔板中接種過(guò)夜，然后與Fura-2 AM或Fura-8 AM鈣測(cè)定染料上樣溶液孵育1小時(shí)。ATP劑量由Flexstation添加。

雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑選擇指南

下表列出了細(xì)胞滲透性雙波長(zhǎng)比率鈣指示劑的規(guī)格，其吸收和發(fā)射最大值以及其鈣解離常數(shù)等。請(qǐng)根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)選擇最佳的試劑。(其他形式的試劑如鈉鹽、鉀鹽等，請(qǐng)參考下文“相關(guān)產(chǎn)品”)