ELISA三種常見測定方法及原理分析
今天百螢為大家介紹一下關(guān)于ELISA的小知識，什么是ELISA？ELISA的檢測方法有哪些？優(yōu)缺點是什么？最好用的ELISA檢測試劑/試劑盒是什么？感興趣的朋友一起來看看吧！
酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）是一種使用酶標(biāo)儀進行測定的免疫測定法，用于檢測和定量生物分子，例如抗體、蛋白質(zhì)、激素或肽，以及表征蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-核酸相互作用。在ELISA中，將用于實驗的靶標(biāo)（通常是抗原）固定在固體表面上，然后用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）的酶綴合抗體進行檢測。通過與被酶催化的底物孵育來實現(xiàn)定量，從而產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。
酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）概述
ELISA測定法通常在96孔板中進行。這些板被設(shè)計成通常通過直接吸附到微量滴定板的表面上或間接地通過預(yù)先包被的抗體間接地結(jié)合和固定抗原。固定后，將一抗引入樣品中，與抗原形成免疫復(fù)合物。一抗可以共價標(biāo)記到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素標(biāo)記，則一抗本身可以使用酶標(biāo)記的二級抗體或鏈霉親和素偶聯(lián)物間接檢測。通過與合適的底物孵育來評估共軛酶的活性，從而實現(xiàn)檢測，該底物會產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。試劑盒在靈敏度和成像設(shè)備的兼容性方面各不相同。
直接與間接檢測
在ELISA中檢測一級抗體-抗原復(fù)合物的方法可以是直接的或間接的（圖1）。在直接檢測方法中，與報告酶（例如HRP或AP）綴合的單一一抗可以直接檢測靶抗原。通過間接檢測，可以依次使用雙抗體系統(tǒng)檢測目標(biāo)靶標(biāo)。首先，將樣品與針對目標(biāo)抗原的未標(biāo)記一抗孵育。然后，使用一抗特異的酶標(biāo)二抗檢測其存在，從而檢測靶抗原。如果使用生物素化的一抗檢測抗原，則使用酶標(biāo)記的抗生蛋白鏈菌素偶聯(lián)物作為您的第二檢測試劑。
使用哪種檢測方法取決于靶抗原的表達水平。為了檢測高度表達的抗原，直接檢測是合適的方法。當(dāng)靈敏度至關(guān)重要時，例如檢測低豐度靶標(biāo)或表達不良的抗原，請使用間接檢測方法來增強信號。
圖1.使用靶標(biāo)特異性抗體進行直接和間接抗原檢測的圖示。
ELISA的三種檢測方法
1.直接法
在直接ELISA中，抗原通過被動吸附直接固定在板的表面，并使用HRP標(biāo)記的一抗進行檢測。將無色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。在所有ELISA法中，直接ELISA分析最簡單，執(zhí)行最快，但靈敏度最低。
方案：比色直接ELISA
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圖2：直接ELISA圖解。 |
| 直接ELISA檢測 | ||
| 優(yōu)點 |
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| 缺點 |
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2.間接法
間接ELISA本質(zhì)上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中，用于檢測抗原的一抗是未偶聯(lián)的。取而代之的是，對一抗的宿主物種具有反應(yīng)性的酶標(biāo)二級抗體被用于檢測一抗-抗原復(fù)合物（間接檢測抗原）。將無色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。與直接ELISA相比，使用輔助檢測試劑具有明顯的優(yōu)勢，即信號放大。
方案：比色間接ELISA
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圖3：間接ELISA圖解。 |
| 間接ELISA檢測 | ||
| 優(yōu)點 |
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| 缺點 |
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3.夾心法
夾心ELISA分析是最常用的ELISA形式。它需要使用匹配的抗體對，從而每種抗體對抗原上不同的非重疊表位具有特異性。首先將一種抗體，稱為捕獲抗體，包被在多孔微量滴定板的表面上，以促進靶抗原的固定。然后，第二種抗體（稱為檢測抗體）與捕獲抗體-抗原復(fù)合物結(jié)合。最后，添加對檢測抗體（而非捕獲抗體）具有特異性的酶標(biāo)記的第二抗體偶聯(lián)物。
方案：比色夾心ELISA
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圖4：夾心ELISA圖解。 |
| 夾心ELISA檢測 | ||
| 優(yōu)點 |
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| 缺點 |
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通用ELISA測定試劑盒
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | Ex（nm） | Em（nm） | 規(guī)格 | 價格 |
| 11540 | Amplite 熒光法羊抗鼠IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測試劑盒 紅色熒光 | 571 | 585 | 1000 Tests | 2460 |
| 11541 | Amplite 熒光法羊抗兔IgG-HRP偶聯(lián)物ELISA檢測試劑盒 紅色熒光 | 571 | 585 | 1000 Tests | 2460 |
| 36370 | Screen Quest cAMP檢測試劑盒*比色ELISA法* | 650 | 1 plate | 3720 | |
| 36371 | Screen Quest cAMP檢測試劑盒*比色ELISA法* | 650 | 10 plate | 24576 | |
| 36373 | Screen Quest cAMP檢測試劑盒*熒光ELISA法* | 571 | 585 | 1 plate | 3720 |
| 36374 | Screen Quest cAMP檢測試劑盒*熒光ELISA法* | 571 | 585 | 10 plate | 24576 |
| 36379 | Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉(zhuǎn)移法* | 390 | 650 | 1 plate | 6240 |
| 36380 | Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉(zhuǎn)移法* | 390 | 650 | 10 plate | 10716 |
| 36381 | Screen Quest 免洗cAMP檢測試劑盒*熒光能量共振轉(zhuǎn)移法* | 390 | 650 | 50 plate | 44100 |
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