q225熒光定量PCR儀高級熱循環(huán)設(shè)置功能詳解-Advanced Cycling
酷搏科技Quantagene q225熒光定量PCR儀配備了許多實用的功能。今天要給大家詳細講一講高級熱循環(huán)設(shè)置(Advanced Cycling)功能的使用方法。
q225默認的熱循環(huán)程序模板，支持最多6個步驟和100個循環(huán)，足夠滿足絕大部分用戶的使用需求。但是一些應(yīng)用中，可能需要前幾個循環(huán)設(shè)置不同的反應(yīng)條件，例如樣本為gDNA時升高前幾個循環(huán)的解鏈溫度，或為提高擴增特異性而升高前幾個循環(huán)的退火溫度等。這時候可以使用q225軟件中的高級熱循環(huán)設(shè)置功能。
后文的設(shè)置說明將以如下熱循環(huán)程序為例：第1-5個循環(huán)：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；
第6-40個循環(huán)：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。
第一步 啟動高級熱循環(huán)設(shè)置功能
在q225操作軟件菜單中選擇
溫度配置—》高級熱循環(huán)設(shè)置
q225默認的熱循環(huán)程序模板，支持最多6個步驟和100個循環(huán)，足夠滿足絕大部分用戶的使用需求。但是一些應(yīng)用中，可能需要前幾個循環(huán)設(shè)置不同的反應(yīng)條件，例如樣本為gDNA時升高前幾個循環(huán)的解鏈溫度，或為提高擴增特異性而升高前幾個循環(huán)的退火溫度等。這時候可以使用q225軟件中的高級熱循環(huán)設(shè)置功能。
后文的設(shè)置說明將以如下熱循環(huán)程序為例：第1-5個循環(huán)：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；
第6-40個循環(huán)：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。
第一步 啟動高級熱循環(huán)設(shè)置功能
在q225操作軟件菜單中選擇
溫度配置—》高級熱循環(huán)設(shè)置
打開后彈出高級熱循環(huán)設(shè)置對話框
勾選啟用高級熱循環(huán)設(shè)置
勾選啟用高級熱循環(huán)設(shè)置
第二步 設(shè)置第1組循環(huán)
在左側(cè)的編輯區(qū)域輸入第1組循環(huán)，例如：
循環(huán)步驟數(shù)為2；
第一步解鏈：98 ℃ 10s；
第二步退火+延伸：65 ℃ 30s；
循環(huán)數(shù)為5；
在第2步采集熒光信號。
完成后點擊應(yīng)用
第3步 加入第2組循環(huán)
單擊 插入 按鈕，增加一組新的循環(huán)
在左側(cè)的編輯區(qū)域輸入第2組循環(huán)：
循環(huán)步驟數(shù)為2；
第一步解鏈：95 ℃ 5s；
第二步退火+延伸：60 ℃ 15s；
循環(huán)數(shù)為35；
在第2步采集熒光信號。
完成后點擊應(yīng)用
第4步 查看和編輯
在右側(cè)的表格中可以看到每一組熱循環(huán)的詳細配置
通過單擊左側(cè)的 插入 刪除 按鈕，來新增和刪除組
通過單擊右側(cè)表格，或者單擊左側(cè)組名兩邊的箭頭，來切換當前編輯的溫度組。
編輯完成后不要忘記點擊 應(yīng)用 按鈕 使得更改生效哈
完成全部設(shè)置后，點擊 確認 按鈕
第5步 開始實驗
返回主界面，可以看到原本設(shè)置循環(huán)溫度和時間的區(qū)域，已經(jīng)提示啟用了高級熱循環(huán)設(shè)置。
接下來就可以正常開始實驗啦~
高級熱循環(huán)功能
- 最多支持10組循環(huán)
- 每組循環(huán)支持最多6個步驟，循環(huán)數(shù)最多100
- 即總共支持最多1000個循環(huán)
另一種選擇
如果在40個循環(huán)前，想要額外增加3個循環(huán)進行預(yù)擴增，預(yù)擴增階段的溫度設(shè)置與循環(huán)階段的溫度設(shè)置不同，且預(yù)擴增階段不采集熒光（不參與Ct值計算）。
此時可以考慮在循環(huán)前步驟中開啟循環(huán)功能
勾選 循環(huán)前 框中的 開啟循環(huán) 選項
例如需要設(shè)置的溫度參數(shù)為
熱激活：95 ℃ 60s；
預(yù)擴增循環(huán)：3個循環(huán)，不采集熒光信號，98 ℃ 20s，65 ℃ 30s；
擴增循環(huán)：40個循環(huán)，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集熒光。
擴增循環(huán)：40個循環(huán)，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集熒光。
則按照上圖進行設(shè)置，在開啟循環(huán)下方，設(shè)置循環(huán)步驟為2-3，共3循環(huán)。
上述兩個功能默認不開啟，如有需要請聯(lián)系技術(shù)支持為您開啟。
本期高級熱循環(huán)設(shè)置功能就為您介紹到這里。
如果您還需要何種功能的介紹，或者使用中有任何意見和建議，歡迎留言或者聯(lián)系酷搏科技技術(shù)支持[email protected]。
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