阿爾茲海默氏�。�Alzheimer disease，AD）是一種進(jìn)行性疾病，涉及大腦神經(jīng)元退化，并導(dǎo)致各種癥狀，最顯著的是記憶力喪失。科學(xué)家們多年來(lái)一直致力于在此疾病的發(fā)病機(jī)制、診斷、治療等方面開(kāi)展研究，力求解決這個(gè)威脅人類健康安全的世紀(jì)難題。

 

β-粥樣淀粉一直被科學(xué)家認(rèn)為是Alzheimer's disease (AD)疾病的起因。而γ分泌酶作為一種膜蛋白酶，可以直接或間接的產(chǎn)生各種amyloid peptide (Aβ) ，所以以γ分泌酶為靶點(diǎn)的機(jī)制和應(yīng)用研究也最多。Presenilin早老素，作為γ-secretase四個(gè)亞基之一的催化亞基，負(fù)責(zé)β-amyloid (Aβ)肽的產(chǎn)生，超過(guò)200 Alzheimer’s 疾病相關(guān)的突變?cè)趐resenilin 1 (PS1) and PS2中被確認(rèn)。但有趣且有爭(zhēng)議的是，這些相關(guān)的AD疾病突變?cè)讦?secretase其他三個(gè)亞基中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。這預(yù)示著早老素有別于γ-secretase的其他功能。為證實(shí)這一假設(shè)，找到與PS結(jié)合蛋白是非常重要的一步。

 

 

 

研究發(fā)現(xiàn)，Bax-inhibitor 1 (BI1)，是一個(gè)進(jìn)化保守的跨膜蛋白，可以穩(wěn)定與PS1結(jié)合，但不與具完整亞基結(jié)構(gòu)的γ-secretase結(jié)合。加入底物APP-C99，通過(guò)AlphaLISA檢測(cè)Aβ40和Aβ42的產(chǎn)生情況，來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證BI1的細(xì)胞功能。發(fā)現(xiàn)PS1–BI1復(fù)合物不具備水解酶活性。在等摩爾濃度下，BI1對(duì)γ-secretase的蛋白水解活性沒(méi)有影響，但在將BI1提高200倍摩爾的條件下，γ-secretase蛋白水解活性減少了一半。

 

AlphaLISA方法檢測(cè)PS1–BI1復(fù)合物對(duì)APP-C99的水解活性

 

這直接預(yù)示了PS1除了參與γ-secretase外，可能還具有其他的細(xì)胞功能。BI1是一種被認(rèn)為在細(xì)胞凋亡和鈣通道調(diào)控中起作用的蛋白，此研究結(jié)果直接將PS1與BI1聯(lián)系起來(lái)，這一發(fā)現(xiàn)為研究PS1的功能和AD的發(fā)生提供了更多的可能性。

 

 

 

 

ALPHA的方法采用單體氧作為能量擴(kuò)散的載體，其擴(kuò)散距離可以達(dá)到200nm，發(fā)光原理為化學(xué)反應(yīng)發(fā)光，具有背景干凈、信噪比高的特點(diǎn)，因此更適合于復(fù)雜樣品的檢測(cè)，如組織液、血清、組織裂解液等，步驟少、方法簡(jiǎn)單、均相反應(yīng)、不需要洗滌，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量更高。同時(shí)推薦選擇具有HTS ALPHA檢測(cè)模塊的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行抗體的篩選，可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間。

 

使用ALPHA的方法進(jìn)行Aβ的檢測(cè)是理想之選，可以通過(guò)商品化的Aβ檢測(cè)劑盒檢測(cè)Aβ的量：

 

 

Amyloid β 1-15

Amyloid β 1-40 (human)

Amyloid ß 1-40 (mouse/rat)

Amyloid β 1-42 (human)

Amyloid β 1-42 (mouse/rat)

Amyloid β 1-x

Amyloid β oligomers

Total or oligomerized Aβ 42 (Two in one)

 

 

 

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1. Wu S, Song W, Wong CCL，et al.,(2019).Bax inhibitor 1 is a γ-secretase–independent presenilin-binding protein. Proc Natl Acad Sci U S A. Jan 2;116(1):141-147.

2. Stéphanie Chasseigneaux,et al.,(2012). Functions of Aβ, sAPPα and sAPPβ : similarities and differences. J. Neurochem. 120 (Suppl. 1), 99–108.

3. Ting-Hai Xu, Yan Yan, Yanyong Kang, et al., (2016). Alzheimer’s disease-associated mutations increase amyloid precursor protein resistance to γ-secretase cleavage and the Aβ42/Aβ40 ratio. Cell Discovery. 2, 16026.

 

 

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