二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)
二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)！
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1．了解二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基配制的原理；
2．掌握制作二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基的關(guān)鍵技術(shù)；
3．學(xué)會(huì)固體培養(yǎng)基含水量的簡(jiǎn)易測(cè)定方法。
二、實(shí)驗(yàn)材料
木屑、種木、麥麩、石膏粉、糖、水、高壓鍋、750g菌種瓶或12cm×28cm×0.04cm的聚丙烯（低壓聚乙烯）折角袋、棉花、棉線、牛皮紙、水桶、磅秤、鐵鍬、掃帚、酒精燈、L形鐵棒、無(wú)棉蓋體等。
三、培養(yǎng)基配方（二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基配方）
1．木屑麥麩培養(yǎng)基（適于各種木腐類食用菌） 闊葉樹木屑78%，麥麩20%，蔗糖1%，石膏粉1%，pH 7.0，含水量為60%。
2．種木培養(yǎng)基（適于各種木腐類食用菌）種木5份，木屑麥麩培養(yǎng)基1份，蔗糖（按干種木重）1%-2%。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1．以木屑麥麩培養(yǎng)基為例
①按配方中比例稱取木屑、麥麩、石膏粉，在干凈水泥地面上混合拌勻。
②按配方中比例稱取蔗糖，溶于少量的水中做母液，使用時(shí)沖稀。
③將蔗糖水先與混勻的干料攪拌均勻，然后再酌情加水，邊拌邊檢查含水量，直至用手握緊培養(yǎng)料時(shí)，指縫有水紋滲出，但沒(méi)有水滴下為度。
④木屑培養(yǎng)基調(diào)濕拌勻后，分裝于750g菌種瓶（袋）中，先裝入2/3，用手握住瓶頸，瓶底放在木屑堆上輕輕礅4～5次，使培養(yǎng)基沉實(shí)，然后繼續(xù)加裝到瓶頸。
⑤用L形鐵棒把培養(yǎng)基壓實(shí)至瓶肩，并把培養(yǎng)基表面壓平。培養(yǎng)基的松緊度要求瓶底、瓶中部稍松，上部稍實(shí)，以利通氣發(fā)菌。
⑥用直徑為1.5 cm的尖尾木棒在培養(yǎng)基中央鉆一個(gè)圓洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。
⑦洗凈瓶壁，將已裝好培養(yǎng)基的瓶豎放在裝有清水的大盆內(nèi)，洗凈外壁，然后將菌種瓶倒置略傾斜放入水中，讓水進(jìn)入至接近培養(yǎng)基料面（不要接觸料面），旋轉(zhuǎn)玻璃瓶，利用瓶?jī)?nèi)水旋轉(zhuǎn)沖力，將瓶肩內(nèi)壁木屑沖洗干凈。
⑧用干布將瓶口擦干，塞上棉塞，棉塞的表面要光滑，松緊適中，以捉住棉塞頭而整個(gè)容器不會(huì)跌落，又能拔出棉塞為宜。
⑨包上牛皮紙，放入高壓鍋中滅菌，壓力是0. 11～0. 14MPa，1.5～2h。
2．種木培養(yǎng)基先把制好的種木（楔形或圓柱形）曬干后，放入1%～2%的蔗糖水溶液中浸泡12～16h，讓其吸足水分。取一塊圓柱木用小刀從中央縱切開(kāi)，無(wú)白心為吸足了水分。然后用五份種木，加入1份配好的木屑麥麩培養(yǎng)基，混勻后裝瓶，種木之間用木屑培養(yǎng)基填滿，最后在面上再蓋一層木屑培養(yǎng)基，用L形鐵棒壓面，以防洗滌時(shí)種木跌落。塞好棉塞，包上牛皮紙．高壓滅菌(0. 14MPa，2h)。
3．塑料袋裝培養(yǎng)基
(1)稱料、拌料。按比例和要求配制培養(yǎng)基，如配制木屑麥麩培養(yǎng)基同上述木屑麥麩培養(yǎng)基制備過(guò)程。
(2)裝料。先裝入少量的培養(yǎng)基，將袋底整成方形，然后邊裝料邊壓，使其松緊適中，整平料面后，用1. 5～2. 0cm直徑的圓形尖頭木棒，在料中央打洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。
(3)封口。將塑料套環(huán)(高3.5cm，口徑3cm)套入塑料袋口，向外翻折，用手把口攥實(shí)，塞上棉塞，包上牛皮紙。
(4)滅菌。如采用高壓滅菌0.11～0. 14MPa，2h，應(yīng)緩慢放氣，否則易引起脹袋。
五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1．簡(jiǎn)要敘述二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基制作步驟。
2．如何用手測(cè)法檢查培養(yǎng)料的含水量？
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1．了解二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基配制的原理；
2．掌握制作二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基的關(guān)鍵技術(shù)；
3．學(xué)會(huì)固體培養(yǎng)基含水量的簡(jiǎn)易測(cè)定方法。
二、實(shí)驗(yàn)材料
木屑、種木、麥麩、石膏粉、糖、水、高壓鍋、750g菌種瓶或12cm×28cm×0.04cm的聚丙烯（低壓聚乙烯）折角袋、棉花、棉線、牛皮紙、水桶、磅秤、鐵鍬、掃帚、酒精燈、L形鐵棒、無(wú)棉蓋體等。
三、培養(yǎng)基配方（二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基配方）
1．木屑麥麩培養(yǎng)基（適于各種木腐類食用菌） 闊葉樹木屑78%，麥麩20%，蔗糖1%，石膏粉1%，pH 7.0，含水量為60%。
2．種木培養(yǎng)基（適于各種木腐類食用菌）種木5份，木屑麥麩培養(yǎng)基1份，蔗糖（按干種木重）1%-2%。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1．以木屑麥麩培養(yǎng)基為例
①按配方中比例稱取木屑、麥麩、石膏粉，在干凈水泥地面上混合拌勻。
②按配方中比例稱取蔗糖，溶于少量的水中做母液，使用時(shí)沖稀。
③將蔗糖水先與混勻的干料攪拌均勻，然后再酌情加水，邊拌邊檢查含水量，直至用手握緊培養(yǎng)料時(shí)，指縫有水紋滲出，但沒(méi)有水滴下為度。
④木屑培養(yǎng)基調(diào)濕拌勻后，分裝于750g菌種瓶（袋）中，先裝入2/3，用手握住瓶頸，瓶底放在木屑堆上輕輕礅4～5次，使培養(yǎng)基沉實(shí)，然后繼續(xù)加裝到瓶頸。
⑤用L形鐵棒把培養(yǎng)基壓實(shí)至瓶肩，并把培養(yǎng)基表面壓平。培養(yǎng)基的松緊度要求瓶底、瓶中部稍松，上部稍實(shí)，以利通氣發(fā)菌。
⑥用直徑為1.5 cm的尖尾木棒在培養(yǎng)基中央鉆一個(gè)圓洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。
⑦洗凈瓶壁，將已裝好培養(yǎng)基的瓶豎放在裝有清水的大盆內(nèi)，洗凈外壁，然后將菌種瓶倒置略傾斜放入水中，讓水進(jìn)入至接近培養(yǎng)基料面（不要接觸料面），旋轉(zhuǎn)玻璃瓶，利用瓶?jī)?nèi)水旋轉(zhuǎn)沖力，將瓶肩內(nèi)壁木屑沖洗干凈。
⑧用干布將瓶口擦干，塞上棉塞，棉塞的表面要光滑，松緊適中，以捉住棉塞頭而整個(gè)容器不會(huì)跌落，又能拔出棉塞為宜。
⑨包上牛皮紙，放入高壓鍋中滅菌，壓力是0. 11～0. 14MPa，1.5～2h。
2．種木培養(yǎng)基先把制好的種木（楔形或圓柱形）曬干后，放入1%～2%的蔗糖水溶液中浸泡12～16h，讓其吸足水分。取一塊圓柱木用小刀從中央縱切開(kāi)，無(wú)白心為吸足了水分。然后用五份種木，加入1份配好的木屑麥麩培養(yǎng)基，混勻后裝瓶，種木之間用木屑培養(yǎng)基填滿，最后在面上再蓋一層木屑培養(yǎng)基，用L形鐵棒壓面，以防洗滌時(shí)種木跌落。塞好棉塞，包上牛皮紙．高壓滅菌(0. 14MPa，2h)。
3．塑料袋裝培養(yǎng)基
(1)稱料、拌料。按比例和要求配制培養(yǎng)基，如配制木屑麥麩培養(yǎng)基同上述木屑麥麩培養(yǎng)基制備過(guò)程。
(2)裝料。先裝入少量的培養(yǎng)基，將袋底整成方形，然后邊裝料邊壓，使其松緊適中，整平料面后，用1. 5～2. 0cm直徑的圓形尖頭木棒，在料中央打洞，洞深為料層的4/5，整平洞穴四周料面。
(3)封口。將塑料套環(huán)(高3.5cm，口徑3cm)套入塑料袋口，向外翻折，用手把口攥實(shí)，塞上棉塞，包上牛皮紙。
(4)滅菌。如采用高壓滅菌0.11～0. 14MPa，2h，應(yīng)緩慢放氣，否則易引起脹袋。
五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1．簡(jiǎn)要敘述二級(jí)菌種和三級(jí)菌種培養(yǎng)基制作步驟。
2．如何用手測(cè)法檢查培養(yǎng)料的含水量？
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