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                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 原代細(xì)胞免疫熒光鑒定步驟【賽百慷】

                                                              原代細(xì)胞免疫熒光鑒定步驟【賽百慷】

                                                              瀏覽次數(shù):4267 發(fā)布日期:2017-8-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

                                                              為了更好的幫助客戶提供真實(shí)的原代細(xì)胞,使用免疫熒光鑒定出提取的細(xì)胞類型,免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是:特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。 一下是賽百慷技術(shù)人員提供的免疫熒光細(xì)胞鑒定的步驟,僅做參考:

                                                              1.細(xì)胞爬片

                                                              取4片玻璃片于24孔板中,每孔加入培養(yǎng)基1mL,加入細(xì)胞0.02million個/孔。置培養(yǎng)箱2h或過夜。

                                                              2.固定

                                                              細(xì)胞爬片后,吸出培養(yǎng)基,用PBS洗一遍,加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS,放4℃過夜。

                                                              3.破膜封閉

                                                              將玻片除去水分,置于培養(yǎng)皿支撐物上,玻璃片封閉液配置:0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合,再加10% 血清,取50uL破膜封閉液滴于防水膜上,將玻片上有細(xì)胞的一面蓋上2h。

                                                              4.一抗孵育
                                                              一抗配置:抗體與PBS 1:100(200)稀釋
                                                              破膜后,取50uL一抗于防水膜上(濕盒中),將玻片有細(xì)胞的一面蓋上置于4℃(最多可放置一周)
                                                              陰性對照組可用PBS代替一抗。

                                                              5.二抗孵育
                                                              PBS洗3×5min/次,
                                                              二抗混合液配置:二抗:PBS=1:500
                                                              DAPI:PBS=1:1000
                                                              防水膜上滴50uL二抗混合液,蓋上玻片,避光,室溫放置2h。

                                                              6.包埋
                                                              PBS洗3×5min/次,玻片上各滴1滴Fluoromount-G,將有細(xì)胞的一面蓋上。

                                                              來源:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司
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