甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI甲磺酸乙酯（EMS）細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑是一種旨在使用烷化劑甲磺酸乙酯誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生變異而產(chǎn)生HPRT或TK基因功能缺失的突變株，成為篩選應(yīng)用標(biāo)記細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于動(dòng)物細(xì)胞和人體細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，性能穩(wěn)定，突變頻率高。

技術(shù)背景

甲磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate，EMS）是一種化學(xué)誘變致畸的烷化劑（alkylating agent）。它將導(dǎo)致細(xì)胞次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase；HPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（thymidine kinase，TK）基因座發(fā)生位點(diǎn)突變，而引起基因功能缺失。由此采用6-硫氫基鳥(niǎo)糞嘌呤（6-thioguanine；6-TG）和5-溴脫氧尿嘧啶（5-Bromodeoxyuridine；BudR）分別篩選TK和HPRT缺失型細(xì)胞，因?yàn)?-TG是PURINES的結(jié)構(gòu)替代物，而B(niǎo)UdR是THYMIDINE的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，當(dāng)TK和HPRT正常的情況下，它們將利用6-TG和BUdR進(jìn)行DNA復(fù)制而使細(xì)胞死亡，反之，它們無(wú)法利用，細(xì)胞則繼續(xù)生存。這是負(fù)向選擇。但是HPRT正常的細(xì)胞（例如正常人體細(xì)胞，其X染色體的長(zhǎng)臂上帶有此基因）能在氨基嘌呤胸苷（hypoxanthine/aminopterin/thymidine；HAT）培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，這是正向選擇。