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cDNA文庫從而使它在個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞衰老和死亡調(diào)控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是研究工作中最常使用到的基因文庫。
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| 服務(wù)商： 百博明創(chuàng)（北京）生物科技有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
技術(shù)簡介：
cDNA文庫是以特定的組織或細(xì)胞mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄形成的互補(bǔ)DNA（cDNA）與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌形成重組DNA克隆群，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細(xì)胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細(xì)胞中，在特定發(fā)育階段表達(dá)的蛋白質(zhì)的編碼基因，因此cDNA文庫具有組織或細(xì)胞特異性。cDNA文庫比基因組DNA文庫小得多，能夠比較容易從中篩選克隆得到細(xì)胞或組織特異表達(dá)的基因。cDNA文庫在研究具體某類特定細(xì)胞中基因組的表達(dá)狀態(tài)及表達(dá)基因的功能鑒定方便具有特殊的優(yōu)勢，從而使它在個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞衰老和死亡調(diào)控等生命現(xiàn)象的研究中具有更為廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是研究工作中最常使用到的基因文庫。
經(jīng)典cDNA文庫構(gòu)建基本原理：用Oligo（dT）作逆轉(zhuǎn)錄引物，或者用隨機(jī)引物，給所合成的cDNA 加上適當(dāng)?shù)倪B接接頭，連接到適當(dāng)?shù)妮d體中獲得cDNA文庫。其基本步驟包括：（1）mRNA的提取。獲取高質(zhì)量的mRNA是構(gòu)建高質(zhì)量的cDNA文庫的關(guān)鍵步驟之一。（2）cDNA第一條鏈的合成。（3）cDNA第二條鏈的合成。（4）雙鏈cDNA的修飾。（5）雙鏈cDNA的分子克隆。（6）cDNA文庫的擴(kuò)增。（7）cDNA文庫鑒定評價(jià)。
客戶須知：
1. 客戶須在實(shí)驗(yàn)開始前確保其提供材料的數(shù)量和質(zhì)量，并提供相關(guān)信息。
客戶可提供組織（200～1000μg）、細(xì)胞（106）或總RNA （>1μg ），請務(wù)必保持樣品新鮮，RNA無任何降解，植物材料應(yīng)避免過老的組織，盡量用柔嫩部位，以確保文庫質(zhì)量。同時(shí)請盡量提供物種基因組背景資料信息，如：基因組大小，基因平均長度，預(yù)計(jì)表達(dá)的基因數(shù)量等等。
材料具體要求：
A. 動(dòng)物、植物、微生物組織 請?zhí)峁┳懔康男迈r樣品（4℃保存，不超過一天）或?qū)⑿迈r樣品立即存于液氮或-80℃后保存不超過一個(gè)星期。
注意： 用植物樣品構(gòu)建基因組文庫，為了降低文庫中的葉綠體污染，樣品須是植物的黃化苗嫩芽。若需建cDNA文庫，樣品必須是新鮮保存的。
B. RNA 如要提供RNA，要求總RNA＞500ug，濃度＞1ug/ul；mRNA＞3ug，濃度＞50ng/ul；OD260/OD280值：2.0，以我方電泳膠圖、紫外分析儀定量檢測為準(zhǔn)。 RNA的總量根據(jù)庫容量不同會(huì)有所增加。
B. RNA 如要提供RNA，要求總RNA＞500ug，濃度＞1ug/ul；mRNA＞3ug，濃度＞50ng/ul；OD260/OD280值：2.0，以我方電泳膠圖、紫外分析儀定量檢測為準(zhǔn)。 RNA的總量根據(jù)庫容量不同會(huì)有所增加。
注意： a) 建議由我方提取RNA；b) 對于客戶提供的RNA，由于樣品原因建庫可能沒有結(jié)果或結(jié)果不好，其損失和責(zé)任全部由樣品提供方承擔(dān)；c)由樣品質(zhì)量產(chǎn)生的任何問題，其損失和責(zé)任應(yīng)全部由樣品提供方承擔(dān)。
2. 本公司在收到客戶提供的研究材料后會(huì)在第二個(gè)工作日起開始服務(wù)工作。
3. 工作完成后，本公司會(huì)將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶，同時(shí)根據(jù)客戶要求處理相關(guān)材料。
4. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失全部由客戶承擔(dān)。
服務(wù)承諾：
1. 本公司將在保證質(zhì)量的前提下，在最短的時(shí)間內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)。
2. 本公司保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信。
3. 公司將對所有技術(shù)服務(wù)相關(guān)材料信息保密，并會(huì)在服務(wù)完成后按客戶要求對相關(guān)材料進(jìn)行合理處理。
服務(wù)周期：
實(shí)驗(yàn)周期一般為得到合格的總RNA后15～45個(gè)工作日。
1. 從客戶提供的材料中提取高質(zhì)量的mRNA。
2. 根據(jù)客戶需求構(gòu)建普通cDNA文庫、全長cDNA文庫和均一化cDNA文庫。
服務(wù)內(nèi)容：
百博明創(chuàng)（北京）生物科技有限公司擁有一批優(yōu)秀的文庫構(gòu)建專業(yè)技術(shù)人員，可以提供標(biāo)準(zhǔn)化cDNA文庫構(gòu)建以及EST測序和分析服務(wù)，可以針對動(dòng)物、植物、微生物等的組織和細(xì)胞等材料進(jìn)行文庫構(gòu)建（普通cDNA文庫、全長cDNA文庫和均一化cDNA文庫）。
A.材料用量少，只需要1mg的Total RNA。
B.采用Clontech SMART專利技術(shù)，技術(shù)成熟，全長比率高。
（2）均一化文庫構(gòu)建
文庫特點(diǎn)：
1.無需反復(fù)雜交過程，均一化程度高。
2.均一化后平均插入片斷大小無明顯變化。
1.無需反復(fù)雜交過程，均一化程度高。
2.均一化后平均插入片斷大小無明顯變化。
（3）全長文庫構(gòu)建
文庫特點(diǎn)：
1.不經(jīng)過PCR過程，容易獲得低豐度基因
2.全長比例高（全長比例>80%）
3.樣品用量大，需要25mg的mRNA，因此，不適合樣品量少的材料。
3.樣品用量大，需要25mg的mRNA，因此，不適合樣品量少的材料。
交貨產(chǎn)品：
A. 產(chǎn)物電泳圖譜；
B. 初始庫，保存在-20℃；
C. 文庫評價(jià)數(shù)據(jù)，包括庫容量，插入片段平均長度，重組效率，cDNA完整性評價(jià)等。技術(shù)指標(biāo)：庫容≥1.0×106，insert≥400 bp，平均 insert≥1.3Kb
D. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包括實(shí)驗(yàn)流程，材料和方法等）。
優(yōu)惠報(bào)價(jià)：
cDNA文庫構(gòu)建：1-3萬元人民幣
全長cDNA文庫構(gòu)建：3.0-5.0萬元人民幣
均一化cDNA文庫構(gòu)建：3.5-6萬元人民幣
cDNA測序：
≥10,000條序列 20元/條
5,000-10,000條序列 25元/條
≤5000條序列 30元/條
信息服務(wù)：1.5-4.0萬元
基本信息服務(wù)：從峰圖到序列的轉(zhuǎn)化，控制低質(zhì)量，去除載體序列；序列拼接；EST注釋；ORF預(yù)測及分析；利用 nr，nt數(shù)據(jù)庫進(jìn)行注釋。
高級信息服務(wù)：代謝途徑分析；功能蛋白分析；Interpro功能域分析；序列屬性及其對應(yīng)unigene分析；COG分析；EST相關(guān)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫構(gòu)建。
BAC文庫構(gòu)建篩選專家-百博明創(chuàng)
因?yàn)?strong>專注，所以更專業(yè)！
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