生產(chǎn)的Anti-Flag Magnetic Beads，即Anti-Flag磁珠，也稱Anti-Flag免疫磁珠或Flag抗體磁珠，是由高品質(zhì)的Flag小鼠單克隆抗體與納米級(jí)氨基磁珠共價(jià)偶聯(lián)而成，可特異性地與動(dòng)植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有Flag標(biāo)簽的蛋白結(jié)合，從而用于帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白或其蛋白復(fù)合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或純化。

Flag標(biāo)簽(Flag-tag)、Myc標(biāo)簽(Myc-tag)、HA標(biāo)簽(HA-tag)、His標(biāo)簽(His-tag)和GST標(biāo)簽(GST-tag)等是表達(dá)載體上最常見的一些標(biāo)簽，通過與這些標(biāo)簽的融合表達(dá)可以非常方便地檢測目的蛋白及與目的蛋白相互結(jié)合的蛋白，也可以非常方便地用于目的蛋白的純化。

Flag-tag是8個(gè)氨基酸殘基(DYKDDDDK)組成的多肽，常用的形式有Flag和3X Flag，通過基因重組技術(shù)把Flag-tag的核酸序列與目的基因的5’端或3’端連接，就可以最終表達(dá)形成Flag-tag的目的蛋白。Flag-tag具有以下優(yōu)點(diǎn)：Flag-tag通常不會(huì)與目的蛋白相互作用，并且大多數(shù)情況下不會(huì)影響目的蛋白的功能；Flag-tag作為標(biāo)簽蛋白，后續(xù)通過Flag抗體(AF519)、Anti-Flag磁珠或Anti-Flag親和凝膠(P2271)即可對(duì)目的基因的表達(dá)、定位及功能進(jìn)行檢測或?qū)δ康牡鞍走M(jìn)行純化、免疫沉淀或免疫共沉淀等；融合在N端的Flag標(biāo)簽，可被腸激酶(Enterokinase, EK)切除(DDDK)，從而得到完美的沒有標(biāo)簽的目的蛋白�；�于以上優(yōu)點(diǎn)，F(xiàn)lag標(biāo)簽已被廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)、純化、鑒定、相互作用和功能等多方面的研究。

 Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)，也被稱為Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads，可以特異性地結(jié)合Flag標(biāo)簽融合蛋白，并可以借助磁力架等磁分離設(shè)備非常便捷地應(yīng)用于帶有Flag標(biāo)簽的融合蛋白或其蛋白復(fù)合物的免疫沉淀或純化等實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品進(jìn)行免疫沉淀的流程參考圖1。

圖1.的Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)免疫沉淀流程圖。

本產(chǎn)品特異性強(qiáng)、靶蛋白結(jié)合量高。與國內(nèi)外大多數(shù)的同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品抗體結(jié)合密度高，對(duì)帶有Flag標(biāo)簽蛋白的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性，并且本產(chǎn)品磁珠粒徑小，不易產(chǎn)生非特異吸附。本產(chǎn)品每毫升磁珠懸濁液含約10mg磁珠，含有不少于0.6mg Flag抗體，通�？山Y(jié)合不少于0.6mg Flag標(biāo)簽融合蛋白，具體的最大結(jié)合量和標(biāo)簽蛋白的分子量大小等相關(guān)。每500微升樣品，通常僅需使用10-20微升磁珠懸濁液，就可以高效地進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。

本產(chǎn)品可結(jié)合多種形式的Flag標(biāo)簽蛋白。本產(chǎn)品可特異性地結(jié)合甲硫氨酸修飾的N端Flag融合蛋白(Met-Flag-Protein)、N端Flag融合蛋白(Flag-Protein)、C端Flag融合蛋白(Protein-Flag)。

本產(chǎn)品結(jié)合目的蛋白速度快。本產(chǎn)品使用了納米級(jí)磁珠(~200nm)，具有超大的比表面積，便于抗體和抗原的快速有效結(jié)合。通常10分鐘內(nèi)即可完成抗原吸附的過程，30分鐘內(nèi)完成目的蛋白免疫沉淀操作�？s短操作時(shí)間可以有效避免在長時(shí)間操作過程中目的蛋白的降解或變性，充分保證目的蛋白的活性。

本產(chǎn)品可選擇多種洗脫方法。本產(chǎn)品可以根據(jù)目的蛋白的結(jié)構(gòu)、生物學(xué)功能及后續(xù)應(yīng)用的要求等，使用多種洗脫方法，包括Flag多肽、酸性和SDS-PAGE上樣緩沖液等洗脫液進(jìn)行洗脫。特別是Flag多肽洗脫后不會(huì)包含抗體的輕鏈和重鏈，可以有效解決免疫沉淀后Western實(shí)驗(yàn)中輕鏈和重鏈的干擾問題。本產(chǎn)品用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果參考圖2。

圖2.  Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果圖。293T (人胚腎細(xì)胞)轉(zhuǎn)染GFP-Flag質(zhì)粒36小時(shí)后，經(jīng)Western及IP細(xì)胞裂解液(P0013)裂解。樣品1為Input，即全細(xì)胞裂解液(total)；樣品2為Mouse IgG Magnetic Beads (小鼠IgG免疫磁珠) (P2171)免疫沉淀后經(jīng)洗脫后的樣品，該Mouse IgG是正常的小鼠IgG (Normal Mouse IgG)，為陰性對(duì)照；樣品3和4都為本磁珠免疫沉淀后的樣品，其中樣品3使用SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)洗脫，樣品4使用3X Flag多肽洗脫。使用SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)洗脫后可以檢測到Flag抗體的輕重鏈，而使用3X Flag多肽洗脫僅含有GFP-Flag，整個(gè)泳道僅檢測到單一的目的條帶。Western印跡成像由。實(shí)際結(jié)果會(huì)因?qū)嶒?yàn)條件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

本產(chǎn)品使用便捷。本產(chǎn)品儲(chǔ)存在特殊保護(hù)液中，不含甘油，可以通過磁性吸附實(shí)現(xiàn)快速高效的分離，無需離心操作。

本產(chǎn)品的主要指標(biāo)如下表：

4℃保存，兩年有效。長期不使用，可以-20℃保存，-20℃可以保存更長時(shí)間。

本產(chǎn)品經(jīng)測試，反復(fù)凍融3次以上，不影響使用效果。

本產(chǎn)品需維持pH為6-8，避免高速離心、干燥或凍存；請(qǐng)勿長時(shí)間將磁珠置于磁場中，否則可能會(huì)引起磁珠聚團(tuán)。

本產(chǎn)品使用前要適當(dāng)充分重懸，即顛倒若干次使磁珠混合均勻，混勻操作須輕柔，不宜劇烈渦旋震蕩等，避免抗體變性等。

在免疫沉淀或純化時(shí)，建議設(shè)置陽性和陰性對(duì)照組。

蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作，并應(yīng)始終放置在4℃或冰浴，以減緩蛋白降解或變性。為有效抑制蛋白降解，可以在蛋白樣品中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物，例如P1005/P1006蛋白酶抑制劑混合物(通用型)、P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(通用型, 質(zhì)譜兼容, 50X)、P1010/P1011 蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100X)、P1050/P1051 蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 50X)等。

如果使用真空泵等儀器吸取上清液，須注意真空泵的吸液強(qiáng)度，以免吸力過大而吸取到聚集的磁珠。

酸性溶液洗脫時(shí)磁珠可能會(huì)發(fā)生聚集，屬于正�，F(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。0.1%的非離子型去垢劑(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不會(huì)影響磁珠的抗體結(jié)合效率。

高濃度的DTT、巰基乙醇、鹽酸胍等對(duì)本產(chǎn)品與標(biāo)簽蛋白的結(jié)合可能有一定影響，但或等都完全適用。不同裂解液的主要特點(diǎn)和差異，以及如何選擇裂解液可參考我們的相關(guān)網(wǎng)頁：。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。