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| 銷售商： 上海雅吉生物科技有限公司 | 查看該公司所有產(chǎn)品 >> |
- 介紹： 基 因 型F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ-leu mtl-1 endA1+簡 要 說 明Stbl3菌株來源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株。基因組含有重組酶recA13突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。High5TM系列Stbl3感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg DNA。操 作 說 明1.0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。2.取-80℃保存的Stbl3電擊感受態(tài)細胞插入冰中5分鐘，待其融化，加入目的DNA(質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打 EP 管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。A.測定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質(zhì)粒 pUC19；B.對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸，DNA 濃度不超過 100 ng/μl，體積不超過 5 μl/50 μl 感受態(tài)。3.用200μl 槍頭(用刀切除 0.5cm 槍尖)將感受態(tài)-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。4.啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用 電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。5.立即 向電擊杯中加入1000 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 S.O.C.，混勻后轉(zhuǎn)移到空50ml管中，并用1ml SOC輕柔沖洗電轉(zhuǎn)杯并轉(zhuǎn)移到50ml管中，另補加3ml SOC培養(yǎng)基， 37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。6.5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大， 若全部涂板請選用直徑 15cm 培養(yǎng)皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)過夜。注 意 事 項1. 加入DNA 時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。2. 電擊感受態(tài)細胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。3. 當DNA 不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉(zhuǎn)化效率急劇下降。4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo)，增大在含有細胞和DNA 的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風險。5. 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒或想獲得較高轉(zhuǎn)化效率，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。6. 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，最好轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀DNA 后用適量TE 緩沖液(10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物，保證DNA 濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風險。7. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作，吸取感受態(tài)細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。8. 電擊感受態(tài)細胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率會
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
- 注意：部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息，我司不保證所提供信息的權(quán)威性，僅供客戶參考交流研究之用。
試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質(zhì)保量，質(zhì)量問題均可免費退換，另提供免費代測服務(wù)。
細胞售后：
1. 細胞運輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
3. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，未告知的視為產(chǎn)品合格。4-10天內(nèi)出現(xiàn)問題，請?zhí)峁┘毎掌图毎霈F(xiàn)問題的照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟，并跟我公司人員及時溝通判定是否重發(fā)，具體可以參照我官網(wǎng)或者隨貨說明書相關(guān)售后條款。
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