【背景資料】:在非凋亡的健康細(xì)胞中,線粒體呼吸產(chǎn)生的細(xì)胞能量以電化學(xué)梯度方式維持,該電化學(xué)梯度構(gòu)成高線粒體跨膜電位。這一膜電位促使細(xì)胞驅(qū)動(dòng)ATP的合成,膜電位的崩解與氧化磷酸化偶聯(lián),產(chǎn)生超氧自由基,釋放線粒體基質(zhì)相關(guān)鈣離子進(jìn)入胞質(zhì)。此外,像細(xì)胞色素C,SMAC/Diablo以及凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)等一些重要凋亡線粒體蛋白的滲漏也與線粒體跨膜電位的流失相關(guān)。膜電位的減少一直被作為凋亡標(biāo)志。有一些分析方法與四甲基羅丹明乙酯(TMRE)相符合。研究者使用TMRE通過共聚焦顯微鏡對(duì)單一線粒體的膜電位變化進(jìn)行評(píng)估。因?yàn)榫粒體的膜電位瓦解時(shí),會(huì)出現(xiàn)染料沿著pH梯度的變化而外流,導(dǎo)致線粒體內(nèi)不含染料。
【產(chǎn)品描述】:MitoShift線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒采用普通的熒光顯微鏡檢測(cè)。染料出現(xiàn)在健康細(xì)胞的線粒體中,一般出現(xiàn)在環(huán)核區(qū)域,為橙紅色,斑點(diǎn)樣熒光。在經(jīng)歷一般的線粒體去極化細(xì)胞中,染料從線粒體向胞質(zhì)的流動(dòng)往往產(chǎn)生明亮的橙色彌散樣熒光信號(hào)。有報(bào)道稱細(xì)胞器各室內(nèi)的染料將減緩由于線粒體內(nèi)高濃度染料導(dǎo)致的熒光淬滅。早期凋亡細(xì)胞的染色往往以這種方式出現(xiàn)。最后,對(duì)于晚期凋亡或已失去細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,染料被釋放入介質(zhì)而不出現(xiàn)熒光。利用這一特征,聯(lián)合使用使得MitoShift與流式細(xì)胞檢測(cè)就能將壞死或晚期凋亡細(xì)胞與健康細(xì)胞區(qū)別開來。
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