細胞介紹
間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是來源于早期中胚層的一類多能干細胞, 在體內(nèi)具有分布廣泛, 體外能夠大量擴增和免疫原性低等特點, 是一種細胞治療的理想種子細胞。自20世紀60年代，F(xiàn)riedenstein等發(fā)現(xiàn)在人骨髓長期培養(yǎng)中, 存在一種形態(tài)類似成纖維細胞的貼壁生長的細胞且移植到小鼠體內(nèi)具有成骨能力和造血支持作用, 將這種細胞命名為骨髓基質(zhì)細胞(Bone marrow stromal cells, BMSCs)。到20世紀90年代末, 人們才成功分離一種具有成骨、成軟骨和成脂肪能力的細胞, 稱之為間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)。
隨后研究者也從其他組織, 如脂肪、臍帶、胎盤、肝臟、骨實質(zhì)和肌肉等中成功分離獲得間充質(zhì)干細胞。作為一類成體干細胞中的間充質(zhì)干細胞, 目前大部分的研究集中在人及大鼠、小鼠這兩種模式動物上, 其他動物的間充質(zhì)干細胞報道相對較少。選取中國特有家禽品種鴨子為實驗材料, 以鴨胚胎肝臟中的間充質(zhì)干細胞為研究對象, 對其進行分離培養(yǎng)鑒定, 進行增殖能力檢測及分化能力鑒定, 為家禽干細胞研究及畜禽遺傳資源保存提供借鑒及參考。鴨胚胎肝間質(zhì)細胞進行慢病毒轉(zhuǎn)染8-12h，連續(xù)傳13代，采用高濃度含嘌呤霉素培養(yǎng)基（4μg/mL）培養(yǎng)，篩選陽性克��；篩選出陽性永生化鴨胚胎肝間質(zhì)細胞。
細胞特性
1）? 來源：上海中科院動物研究所
2）? 含量：>5x105個/mL
3）? 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
4）? 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1)????? 準備鴨胚胎肝臟間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基（dmem 高糖和F12培養(yǎng)基1：1搭配， 10%血清?? ，1%雙抗??? 以及1％自己配置的間質(zhì)細胞因子。）。
2)????? 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)????? 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
? 下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

廈門逸漠生物科技有限公司(Xiamen Immocell Biotechnology Co.,Ltd.)坐落于廈門國家留學創(chuàng)業(yè)園(翔安)產(chǎn)業(yè)園，是一家專注于細胞生物學領(lǐng)域新產(chǎn)品、新技術(shù)開發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。
公司擁有一支具有深厚造詣和豐富經(jīng)驗的高端技術(shù)人才，建設(shè)了高規(guī)格的研發(fā)實驗室與生產(chǎn)車間，建立了規(guī)范的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、客服管理體系。
公司與國內(nèi)外多家醫(yī)院、高等院校、科研院所、生物醫(yī)藥公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場聲譽和廣泛的客戶認可，將努力成為生命科學界可靠的合作伙伴和堅強的技術(shù)后盾。
企業(yè)文化我們的使命：
深耕細胞技術(shù)，共筑人類健康從細胞技術(shù)著手，深入地、多維度地進行探索與積累,發(fā)展新產(chǎn)品與、新技術(shù)服務(wù)于生命科技探索以及人類疾病診療、人類健康發(fā)展事業(yè)。
我們的愿景：
成為生命科學領(lǐng)域被認可與喜歡的公司我們旨在構(gòu)建細胞資源與應(yīng)用中心。我們追求為客戶提供靠譜的產(chǎn)品與技術(shù)，讓他們能夠省心省力的專注于自己的科研工作。我們的愿景是讓客戶獲得成功的同時。成為他們的心中認可與喜歡的公司。
我們的經(jīng)營理念：
1.精益求精、開拓創(chuàng)新把成熟的產(chǎn)品做到非凡，把創(chuàng)新的產(chǎn)品做到超乎想象。
2.專業(yè)高效、合作共贏專業(yè)就是力量，專業(yè)才能高效;合作就會發(fā)展、合作才能共贏。我們秉持這種理念，以我們專業(yè)的產(chǎn)品和服務(wù)，與廣大合作伙伴共同應(yīng)對挑戰(zhàn),共同發(fā)展進步。
我們的價值觀：
1.勇于探索逸漠的精髓基于勇敢地探索，于逆境中的自我激勵、奮然而起，于順境中自我挑戰(zhàn)、自我超越。逸漠人選擇創(chuàng)造更多的價值，選擇擁有精彩的人生。
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3.守護誠信逸漠發(fā)展的過程就是不斷被別人認可的過程。我們忠誠于自己的事業(yè)，守信于他人的事務(wù)，這是我們的寶貴的財富、強大的基石。我們建立誠信、珍惜誠信，可以讓我們更加專注于處理自己的事情，也讓事情處理起來更加簡單、高效。
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