Amplite 熒光總核酸定量試劑盒是以簡單、準(zhǔn)確的方式檢測核酸總量，包括雙鏈 DNA (dsDNA)、單鏈 DNA (ssDNA) 和 RNA。 該試劑盒包含所有基本試劑，包括 Helixyte Green All 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品。 Helixyte Green All 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于測量樣品中可能含有 dsDNA、ssDNA、RNA 和長寡核苷酸的核酸總量。 Helixyte Green All 試劑不加選擇地與 dsDNA、ssDNA 和 RNA 結(jié)合。 Amplite 熒光總核酸定量試劑盒針對使用熒光酶標(biāo)儀測量核酸總量進行了優(yōu)化。

適用儀器

實驗方案

概述

1.添加 100 µL 核酸標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品
2.添加 100 µL Helixyte Green ALL溶液
3.在室溫下孵育 5-10 分鐘
4.檢測Ex/Em=490/525 nm 處的熒光強度

注：以下方案是使用 Helixyte Green All 定量總核酸含量的示例。 打開前讓所有成分升溫至室溫。 沒有關(guān)于 Helixyte Green All（總核酸染色劑）的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。 由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑并小心處理。 應(yīng)特別小心處理 DMSO 原液，因為已知 DMSO 可促進有機分子進入組織。

溶液制備
核酸標(biāo)準(zhǔn)品
將 10 uL 100 ug/mL 核酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分 C）加入 190 uL 檢測緩沖液（組分 B）中，得到 5 ug/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進行 1:3 稀釋，得到連續(xù)稀釋的核酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（ NS1-NS7)。請使用AAT Bioquest連續(xù)稀釋計算器以方便數(shù)據(jù)處理。

Helixyte Green ALL工作溶液
將 100 μL Helixyte Green All（組分 A）加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 B）中，制備 Helixyte Green All 工作溶液。 通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo工作溶液免受光照。
注意：建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備工作溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。 為獲得最佳效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時內(nèi)使用。
注意：10 mL 的工作溶液對于一個 96 孔板就足夠了。

操作步驟

表 1. 96 孔黑色微孔板中核酸標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。 NS= 核酸標(biāo)準(zhǔn)品（NS1 - NS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白； TS=測試樣品

表2.各孔試劑組成

1.根據(jù)表 1 和 2 中提供的布局準(zhǔn)備核酸標(biāo)準(zhǔn) (NS)、空白對照 (BL) 和測試樣品 (TS)。對于 384 孔板，每孔使用 25 µL 試劑，而不是 100 µL。
2.將 100 µL Helixyte Green All 工作溶液加入核酸標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個孔中，使測定體積為 200 µL/孔。 對于 384 孔板，將 25 µL Helixyte Green All 工作溶液添加到每個孔中，以獲得 50 µL/孔的總體積。
3.在室溫下孵育反應(yīng) 5 到 10 分鐘，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm ）處的熒光酶標(biāo)儀檢測熒光增加。

圖示

圖 1. 使用 Amlite 熒光總核酸定量試劑盒在 96 孔黑色板中測量總核酸劑量反應(yīng)。

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d) 開發(fā)用于分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究試劑和試劑盒；
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