生產(chǎn)的Anti-Flag Magnetic Beads，即Anti-Flag磁珠，也稱Anti-Flag免疫磁珠或Flag抗體磁珠，是由高品質(zhì)的Flag小鼠單克隆抗體與納米級氨基磁珠共價偶聯(lián)而成，可特異性地與動植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有Flag標簽的蛋白結合，從而用于帶有Flag標簽的融合蛋白或其蛋白復合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或純化。

Flag標簽(Flag-tag)、Myc標簽(Myc-tag)、HA標簽(HA-tag)、His標簽(His-tag)和GST標簽(GST-tag)等是表達載體上最常見的一些標簽，通過與這些標簽的融合表達可以非常方便地檢測目的蛋白及與目的蛋白相互結合的蛋白，也可以非常方便地用于目的蛋白的純化。

Flag-tag是8個氨基酸殘基(DYKDDDDK)組成的多肽，常用的形式有Flag和3X Flag，通過基因重組技術把Flag-tag的核酸序列與目的基因的5’端或3’端連接，就可以最終表達形成Flag-tag的目的蛋白。Flag-tag具有以下優(yōu)點：Flag-tag通常不會與目的蛋白相互作用，并且大多數(shù)情況下不會影響目的蛋白的功能；Flag-tag作為標簽蛋白，后續(xù)通過Flag抗體(AF519)、Anti-Flag磁珠或Anti-Flag親和凝膠(P2271)即可對目的基因的表達、定位及功能進行檢測或?qū)δ康牡鞍走M行純化、免疫沉淀或免疫共沉淀等；融合在N端的Flag標簽，可被腸激酶(Enterokinase, EK)切除(DDDK)，從而得到完美的沒有標簽的目的蛋白。基于以上優(yōu)點，F(xiàn)lag標簽已被廣泛應用于蛋白表達、純化、鑒定、相互作用和功能等多方面的研究。

 Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)，也被稱為Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads，可以特異性地結合Flag標簽融合蛋白，并可以借助磁力架等磁分離設備非常便捷地應用于帶有Flag標簽的融合蛋白或其蛋白復合物的免疫沉淀或純化等實驗。本產(chǎn)品進行免疫沉淀的流程參考圖1。

圖1.的Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)免疫沉淀流程圖。

本產(chǎn)品特異性強、靶蛋白結合量高。與國內(nèi)外大多數(shù)的同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品抗體結合密度高，對帶有Flag標簽蛋白的結合具有很強的特異性，并且本產(chǎn)品磁珠粒徑小，不易產(chǎn)生非特異吸附。本產(chǎn)品每毫升磁珠懸濁液含約10mg磁珠，含有不少于0.6mg Flag抗體，通常可結合不少于0.6mg Flag標簽融合蛋白，具體的最大結合量和標簽蛋白的分子量大小等相關。每500微升樣品，通常僅需使用10-20微升磁珠懸濁液，就可以高效地進行免疫沉淀實驗。

本產(chǎn)品可結合多種形式的Flag標簽蛋白。本產(chǎn)品可特異性地結合甲硫氨酸修飾的N端Flag融合蛋白(Met-Flag-Protein)、N端Flag融合蛋白(Flag-Protein)、C端Flag融合蛋白(Protein-Flag)。

本產(chǎn)品結合目的蛋白速度快。本產(chǎn)品使用了納米級磁珠(~200nm)，具有超大的比表面積，便于抗體和抗原的快速有效結合。通常10分鐘內(nèi)即可完成抗原吸附的過程，30分鐘內(nèi)完成目的蛋白免疫沉淀操作。縮短操作時間可以有效避免在長時間操作過程中目的蛋白的降解或變性，充分保證目的蛋白的活性。

本產(chǎn)品可選擇多種洗脫方法。本產(chǎn)品可以根據(jù)目的蛋白的結構、生物學功能及后續(xù)應用的要求等，使用多種洗脫方法，包括Flag多肽、酸性和SDS-PAGE上樣緩沖液等洗脫液進行洗脫。特別是Flag多肽洗脫后不會包含抗體的輕鏈和重鏈，可以有效解決免疫沉淀后Western實驗中輕鏈和重鏈的干擾問題。本產(chǎn)品用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果參考圖2。

圖2.  Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag磁珠)用于GFP-Flag融合蛋白的免疫沉淀效果圖。293T (人胚腎細胞)轉染GFP-Flag質(zhì)粒36小時后，經(jīng)Western及IP細胞裂解液(P0013)裂解。樣品1為Input，即全細胞裂解液(total)；樣品2為Mouse IgG Magnetic Beads (小鼠IgG免疫磁珠) (P2171)免疫沉淀后經(jīng)洗脫后的樣品，該Mouse IgG是正常的小鼠IgG (Normal Mouse IgG)，為陰性對照；樣品3和4都為本磁珠免疫沉淀后的樣品，其中樣品3使用SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)洗脫，樣品4使用3X Flag多肽洗脫。使用SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1X)洗脫后可以檢測到Flag抗體的輕重鏈，而使用3X Flag多肽洗脫僅含有GFP-Flag，整個泳道僅檢測到單一的目的條帶。Western印跡成像由。實際結果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

本產(chǎn)品使用便捷。本產(chǎn)品儲存在特殊保護液中，不含甘油，可以通過磁性吸附實現(xiàn)快速高效的分離，無需離心操作。

本產(chǎn)品的主要指標如下表：

4℃保存，兩年有效。長期不使用，可以-20℃保存，-20℃可以保存更長時間。

本產(chǎn)品經(jīng)測試，反復凍融3次以上，不影響使用效果。

本產(chǎn)品需維持pH為6-8，避免高速離心、干燥或凍存；請勿長時間將磁珠置于磁場中，否則可能會引起磁珠聚團。

本產(chǎn)品使用前要適當充分重懸，即顛倒若干次使磁珠混合均勻，混勻操作須輕柔，不宜劇烈渦旋震蕩等，避免抗體變性等。

在免疫沉淀或純化時，建議設置陽性和陰性對照組。

蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作，并應始終放置在4℃或冰浴，以減緩蛋白降解或變性。為有效抑制蛋白降解，可以在蛋白樣品中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物，例如P1005/P1006蛋白酶抑制劑混合物(通用型)、P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(通用型, 質(zhì)譜兼容, 50X)、P1010/P1011 蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動物樣品抽提用, 100X)、P1050/P1051 蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物(哺乳動物樣品抽提用, 50X)等。

如果使用真空泵等儀器吸取上清液，須注意真空泵的吸液強度，以免吸力過大而吸取到聚集的磁珠。

酸性溶液洗脫時磁珠可能會發(fā)生聚集，屬于正�，F(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。0.1%的非離子型去垢劑(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不會影響磁珠的抗體結合效率。

高濃度的DTT、巰基乙醇、鹽酸胍等對本產(chǎn)品與標簽蛋白的結合可能有一定影響，但或等都完全適用。不同裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考我們的相關網(wǎng)頁：。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。