培養(yǎng)細胞的你，是否經(jīng)常發(fā)現(xiàn)自己養(yǎng)的細胞怎么都不如文獻中的漂亮？

實驗是科研的基礎(chǔ)，看似簡單重復(fù)的實驗操作，其中卻有很多技巧和細節(jié)。有的人可以快速掌握，并悟得先機，有的人則是日復(fù)一日的機械性操作。經(jīng)驗藏著掖著不如分享出來，獨樂樂不如眾樂樂。如果你是細胞培養(yǎng)中的高手，快來參加“如何把細胞養(yǎng)得更漂亮”經(jīng)驗分享活動吧，在分享經(jīng)驗造福廣大科研汪的同時，還可以贏得心動大獎。

1.活動規(guī)則

您在養(yǎng)細胞的路上總有或多或少的心得體會，分享一下如何把細胞養(yǎng)得更漂亮的小妙招，就有機會贏得心動大獎哦！您的分享將成為其他科研汪的指南針，加速細胞生物學(xué)研究進展，造福全人類�？靵韰⒓舆@個偉大的活動吧！

2.評選規(guī)則

賽業(yè)生物在干細胞領(lǐng)域已深耕13年，擁有國際一流的干細胞產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)團隊。賽業(yè)生物的專家團成員具備豐富的細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，專家團成員將根據(jù)參賽者提交內(nèi)容的詳細程度，價值高低評選出一二三等獎。

3.大賽日程

投稿時間：2019年10月14日——2019年11月30日

評選時間：2019年12月1日——2019年12月6日

獲獎公示：2019年12月12日

4.獎項設(shè)置
5.主辦方聲明

1、本次大賽無參賽費，不退稿，如參賽者所提供的作品違反任何中國現(xiàn)行法律法規(guī)或者侵犯第三方合法權(quán)益而導(dǎo)致任何爭議、索賠、訴訟等后果，由選手本人承擔全部法律責任，大賽主辦方賽業(yè)（廣州）生物科技有限公司不承擔任何法律責任。

2、所有參賽作品都將被視為授權(quán)大賽主辦方無償用于大賽及相關(guān)活動的宣傳和推廣。但賽業(yè)承諾：不會私自發(fā)表文章/出售參賽作品。

3、本次大賽的最終解釋權(quán)歸賽業(yè)（廣州）生物科技有限公司，主辦方有權(quán)對參賽規(guī)則進行調(diào)整，調(diào)整結(jié)果將第一時間在大賽專題網(wǎng)站進行通知。

6.拋轉(zhuǎn)引玉

（1）文獻案例尋找啟發(fā)

想要做好實驗，好用的產(chǎn)品必不可少。賽業(yè)生物專注干細胞領(lǐng)域13年，干細胞系列產(chǎn)品因優(yōu)良的增殖和分化潛能已助力廣大科研工作者取得豐碩的科研成果，產(chǎn)品也競相見諸于各大期刊，累積超過3000多篇論文引用。如何把細胞養(yǎng)得更漂亮？希望賽業(yè)客戶發(fā)表的文獻案例能給你一些啟發(fā)。
Sihan Lin, Wenjie Zhang, Xinquan Jiang. et al. A Magnesium-Enriched 3D Culture System that Mimics the Bone Development Microenvironment for Vascularized Bone Regeneration. Advanced Science. 2019 DOI: 10.1002/advs.201900209
Immihan Ceren Yasa, Ahmet Fatih Tabak, Oncay Yasa, Hakan Ceylan, Metin Sitti. 3D-Printed Microrobotic Transporters with Recapitulated Stem Cell Niche for Programmable and Active Cell Delivery. Advanced Functional Materials 2019, 148, 1808992. DOI: 10.1002/adfm.201808992.
Ren Xu, Alisha Yallowitz, An Qin. et al. Targeting skeletal endothelium to ameliorate bone loss. Nature Medicine 2018 DOI: 10.1038/s41591-018-0020-z

7.賽業(yè)專家們的小建議

A.復(fù)蘇小妙招

復(fù)蘇過程非常關(guān)鍵，直接影響這一株細胞的生長狀態(tài)和傳代能力。一般而言，復(fù)蘇就是將細胞株從液氮中拿出來后立刻放入-80°C冰箱數(shù)分鐘，待液氮揮發(fā)后迅速放入37振蕩水浴，俗稱“快融”過程，這一過程就是盡快融解細胞內(nèi)的冰晶，減少對細胞的損傷。下一步就是將細胞放入培養(yǎng)基，一種方法是直接加入到培養(yǎng)基，待第二天細胞貼壁后更換新鮮的培養(yǎng)基；第二種方法是加入數(shù)倍體積的培養(yǎng)基混勻后，低速離心去掉對細胞有毒害作用的DMSO，然后把細胞接種到培養(yǎng)皿中。

B. 消化過程注意事項

消化過程會破壞細胞表面蛋白，從而影響細胞狀態(tài)。目前使用較多的操作是，吸走培養(yǎng)基后先用PBS洗1-2遍，然后加入胰酶進行消化，消化到細胞變圓、少量細胞脫落即可加入培養(yǎng)基進行終止。接下來是離心，除去上清。加入適量培養(yǎng)基將細胞吹勻，再轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿的過程也很關(guān)鍵。吹打過程中用力要適度，既要避免用力過小細胞未分散，又要避免用力過大細胞懸液沾黏管壁造成損失，還要避免吹打過多機械剪切力傷害細胞。接種細胞后要適度搖晃培養(yǎng)容器，讓細胞分布均勻。對于接種的細胞，在空間允許的條件下，盡量平放不要堆著放。此外，關(guān)培養(yǎng)箱時需盡量輕柔，有時候細胞出現(xiàn)同心圓分布的情況，就是由于關(guān)門太用力，導(dǎo)致培養(yǎng)基晃動，形成紋路。

C. 凍存注意事項

一般情況下，凍存的細胞越多越好。培養(yǎng)中的細胞，建議在細胞狀態(tài)好、增殖迅速時就凍存一些，而不是養(yǎng)過很多代用不完再凍存。細胞消化離心去上清后加入細胞無蛋白非程序凍存液調(diào)整密度到1×106cell/mL，然后轉(zhuǎn)入凍存管，直接放入-80冷凍過夜，注意凍存管擺放不能過于密集，以免處于內(nèi)部位置的細胞凍存效果差。凍存完成后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。細胞不要長期保存在-80冰箱，以免活力下降。

D. 其他注意事項

除上述的主要操作步驟以外，常用的試劑存儲也很重要。FBS正常存儲溫度是-20，在要使用之前先放到4融化，如果放到室溫或者水浴鍋中融解，血清中的蛋白會大量析出從而影響培養(yǎng)效果。另外胰酶需盡量分裝保存，胰酶在室溫下失活很快，近期用的放在4，其他就存儲在-20。最后就是細胞需要及時傳代和換液，通常為2-3天一次。過于頻繁會影響細胞生成長微環(huán)境，間隔過長則會有營養(yǎng)匱乏、酸堿度失衡等問題。

8.經(jīng)驗分享展示

2019年12月12日公布經(jīng)驗分享及獲獎名單，敬請期待哦