郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
Tu lip  b reaki ng  Pot y vi rus   P ro be  RT - q P C R  K it
產(chǎn)品及特點

本試劑盒可用于檢測郁金香碎色病毒。郁金香碎色病毒（Tulip breaking Potyvirus ， TBV）屬馬鈴薯 Y 病毒科馬鈴薯 Y 病毒屬，只侵染郁金香屬(Tulipa spp.)和百合屬(Lilium spp.)植物，導(dǎo)致郁金香和百合的花瓣和葉片出現(xiàn)斑駁的雜色條紋，感染 TBV 的郁金香不 僅表現(xiàn)出花色雜色，而且植株也會退化。本產(chǎn)品是根據(jù)探針法熒光定量 RT-PCR 原理開發(fā) 的郁金香碎色病毒檢測試劑盒，它具有下列特點：
1.   即開即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2.   引物等組分經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高。
3.   提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.   特異性高，引物是根據(jù)郁金香碎色病毒 RNA 序列高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他 病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.   既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5 個 數(shù)量級。
6.   本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
7.   本產(chǎn)品只能用于科研。
 
成分規(guī)格

產(chǎn)品組成	編號	規(guī)格
2 × OneStep Probe Mix	021101a	550 μl
OneStep Probe Enzyme Mix	021102b	55 μl
DEPC-H2O	070401	1 ml
熒光模板稀釋液	070407	1 ml
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探針混合液	1525190yp	210 μl
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照 (1×10E8  拷貝/μL)	1525190pc	50 μl

 
保存條件

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試 劑。

使用方法
一、RNA 提取(樣本制備區(qū))
用自選方法提取純化樣品 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。建 議使用病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒（Cat:GZ010702-50）提取 RNA。

二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）。
1.    標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL  的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘， 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.    換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.    換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.    重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。

三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
若有 N 個待檢樣品，準(zhǔn)備 N+2 個 qPCR 管(N 個待檢樣品+1個陰性對照+6 個陽性對 照) ，向各 qPCR 管中分別加入下列成分。

成分	樣品管 N+2 個	qPCR    陰性對照	qPCR    陽性對照
2 × OneStep Probe Mix	各 10 μL	10 μL	10 μL
OneStep Probe Enzyme Mix	各 1 μL	1 μL	1 μL
郁金香碎色病毒 RT-qPCR  引物-探針 混合液	各 4 μL	4 μL	4 μL