嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）指的是嵌合抗原受體T細胞通過識別某種腫瘤抗原的抗體的抗原結(jié)合部與CD3-δ鏈或FcεRIγ的胞內(nèi)部分在體外偶聯(lián)為一個嵌合蛋白，通過基因轉(zhuǎn)導的方法轉(zhuǎn)染患者的T細胞，使其表達嵌合抗原受體，使得患者的T細胞被“重編碼”后，能夠生成大量腫瘤特異性的CAR-T細胞。把重新編碼后的嵌合抗原受體T細胞加進患者身體里，這種嵌合抗原受體就像GPS一樣可以特異性地追蹤和識別并引導T細胞殺傷腫瘤細胞。以CAR為基礎(chǔ)的細胞免疫治療是一種新的治療惡性腫瘤的模式，越來越多的臨床試驗結(jié)果證實了CAR-T細胞免疫治療的效力, 特別是血液病方面, 如白血病, 淋巴瘤。當然，在實體瘤的治療方面仍需要不斷努力。
 

2017年日本福岡大學醫(yī)學院學者 Hirotomo Shibaguchi，Naixiang  Luo，Naoto Shirasu 等發(fā)表 OncoTargets and Therapy 文章Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen，使用NEPA21進行電轉(zhuǎn)實驗。
 

文中研究表明，為了增強免疫細胞在腫瘤微環(huán)境下的抗腫瘤活性，研究者使用表達CAR的淋巴細胞結(jié)合IL-2融合蛋白，該融合蛋白含有針對癌胚抗原的單鏈片段抗體(scFv)。通過一系列對CAR進行改造，使其最有效地激活并表達INF-γ（腫瘤壞死因子）。實驗結(jié)果顯示，CAR導向的外周血單個核細胞（PBMCs）與含IL-2形成的融合蛋白的聯(lián)合治療應(yīng)用，對MKN-45的抗腫瘤活性效果顯著增強。

這種新型的CAR 與由功能性細胞因子和全人類單鏈抗體組成的融合蛋白的聯(lián)合治療將可能是一種很有前途的癌癥免疫治療方法。
 

本實驗中研究者們使用了：

NEPA21 電轉(zhuǎn)系統(tǒng)
 

文章對比了不同電轉(zhuǎn)方式，推薦使用NEPA21 電轉(zhuǎn)系統(tǒng)，轉(zhuǎn)染效率高，細胞存活率好。

文中表明，“使用原代細胞核酸轉(zhuǎn)染儀(Lonza Group Ltd, Basel, Switzerland)轉(zhuǎn)染T細胞，轉(zhuǎn)染效率達到40%，但遺憾的是，在其實驗中，培養(yǎng)24小時后的細胞存活率為低于50％。由于我們使用原代細胞來評估單鏈抗體在CAR和融合蛋白中的聯(lián)合抗癌作用，因此在基因轉(zhuǎn)染后提高細胞存活率非常重要。”

“我們比較了2種電穿孔系統(tǒng)，即Nucleofector和NEPA21，其轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率：NEPA21在人T細胞中轉(zhuǎn)染效率較高。因此，我們決定使用NEPA21轉(zhuǎn)染hCR-2基因到PBMCs。（表S 1）”
 

“通過流式細胞儀檢測EGFP的表達，在電穿孔后24小時，NEPA21轉(zhuǎn)染后PBMCs中hCR-2的表達率約為60％，細胞存活率高達95%。”
 

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每個文章背后都有一個支持者~~~
 

1、

2、
 

3、Du SH, Li Z, Chen C, Tan WK, Chi Z, Kwang TW, Xu XH, Wang S
Co-Expansion of Cytokine-Induced Killer Cells and Vγ9Vδ2 T Cells for CAR T-Cell Therapy.

4、Shibaguchi H, Luo N, Shirasu N, Kuroki M, Kuroki M
Enhancement of antitumor activity by using a fully human gene encoding a single-chain fragmented antibody specific for carcinoembryonic antigen.